Наноспан в инструкция по применению: Наноспан а инструкция — JSFiddle

виды, технические характеристики, инструкция по применению

Проекты и планировка

Многие думают, что дом из контейнера будет очень узким и планировка у него будет стандартная — это далеко не так. Раздвинуть границы пространства помогут несколько соединённых вместе контейнеров, между которыми нужно убрать мешающиеся перегородки. Также это может быть многоэтажное строение с винтовой лестницей.

Проект дома чертится с учётом размеров выбранного модуля 20 или 40 футов или набора нескольких модулей. Проектировать строение следует с учётом подвода коммуникаций и ориентируясь на общие нормативы.

Прежде чем начать строительство дома из морских контейнеров, необходимо оформить разрешительные документы, если постройка будет капитальной. Если планируется вводить дом в эксплуатацию через БТИ, необходимо соблюдение действующих нормативов. В этом случае стоит нанять профессиональную проектную организацию.

Далее составляется смета, учитывающая все необходимые строительные материалы. Исходя из веса рассчитывается необходимый фундамент.

Способ укладки

1. Стелить любую пароизоляцию на любой вид крыши нужно после укладки утеплителя. Его можно поставить под профнастил.
2. Гидроизоляцию можно стелить в любом направлении.
3. Если материал укладывает вдоль стропил, нахлест должен получиться непосредственно на уровне стропил. В этих же точках соприкосновения материал нужно тщательно зафиксировать.
4. В местах соприкосновения с водопроводными трубами, которые могут проходить через крышу, мембрана заворачивается вниз, оборачивается вокруг труб и тщательно заклеивается лентой.
5. Некоторые виды материалов требуют обязательного воздушного зазора. Для создания этого пространства достаточно тонких деревянных планок. Они располагаются на расстоянии около 50 см друг от друга.

Разновидности продукции «Изоспан»

Пароизоляция представлена на строительном рынке широким модельным рядом. Каждая разновидность имеет собственные технические характеристики, которые определяют сферу применения материала. Всего изолирующих мембран данного бренда насчитывается порядка 14 разновидностей. Рассмотрим 4 основные категории. В частности:

Группа A

Плёнка предназначена для теплоизоляции помещений и защиты стеновых конструкций от влаги и образования конденсата. Материал выполнен в виде двухсторонней мембраны, одна сторона которой служит изоляцией от ветра и влаги, другая – удаляет испарение.

Чтобы плёнка справлялась со своей функцией, её монтируют с внешней стороны утеплителя.

Группа В

Одна из наиболее популярных и часто применяемых категорий «Изоспана». Особенностью материала этой категории является абсолютная паронепроницаемость. Такие характеристики обусловлены структурой изолирующей мембраны.

Одна сторона плёнки гладкая, другая имеет выраженные шероховатости поверхности. Гладкая структура защищает внутренние помещения от ветра, а ворсинки способствуют отведению влаги.

Группа C

Данная продукция выполняет идентичные функции с «Изоспаном» группы B, но отличается более высокой стоимостью. В основе материала лежит сверхплотное полипропиленовое полотно, которое надёжно защищает элементы конструкции от любых внешних воздействий.

Плёнка подходит для применения в регионах с холодным климатом и обеспечивает изоляцию помещений даже в случае неплотного прилегания стеновых панелей или элементов кровли.

Группа D

Это универсальная плёнка, которая подходит для внутреннего и наружного использования.

Ключевой особенностью материала является высокая устойчивость к механическим повреждениям и нейтральность к воздействию прямых ультрафиолетовых лучей.

Стоит отметить, что на рынке встречаются плёнки класса «A. M» «A. S» «A. Q Proff». В отличие от базовых прототипов, данные плёнки имеют более плотное строение мембраны (часто трёхслойное) и обладают большей устойчивостью на разрыв. Разумеется, улучшенные технические характеристики пропорционально увеличивают и стоимость материала.

Как класть пароизоляцию при утеплении стен

Обе стороны пароизоляции одинаково не пропускают влагу и пар.

Разберемся, как правильно укладывать пароизоляцию на стены. Есть два варианта утепления:

• внутреннее;
• наружное.

Конечно, предпочтительней укладывать теплоизоляцию снаружи помещения, но в этом случае пленка для защиты от пара не требуется. Также имеет значение и материал, который применяется для утепления. Пленка нужна только тогда, когда необходимо защитить теплоизоляцию от влаги и пара. Чтобы разобраться, как правильно укладывать пароизоляционную пленку нужно понять по какому принципу циркулирует воздух. Он всегда двигается с зоны высокого давления (там, где температура выше) в зону низкого давления (там, где температура ниже). Получается, что воздух вместе с влагой старается покинуть теплое помещение и оказаться на улице.

Схема укладки пароизоляции на стену изнутри.

Поэтому и на многочисленных форумах на вопрос о том, какой стороной крепить пароизоляцию к утеплителю якобы специалисты отвечают, что шероховатой. Где у паробарьера шероховатая поверхность? Это полностью гладкий материал с обеих сторон. Как оказалось, эти понятия путают даже сами строители. В нашей предыдущей статье мы доходчиво разъяснили,
.

Еще один часто задаваемый вопрос касательно того, как правильно класть пароизоляцию – это необходимость вентилируемого зазора. Некоторые производители пленок пишут, что вентзазор не нужен вовсе, но делать скоропалительные выводы все же не стоит. При монтаже утеплительного пирога для стен изнутри вентзазор нужен между пленкой и отделкой, но необязателен (хотя не помешает) между пленкой и утеплителем. Здесь мы несколько подменяем понятие вентзазора, так как в пространстве между пленкой и отделкой (утеплителем тем более) не всегда получается достигнуть необходимой циркуляции воздуха.

Давайте пока оставим эти тонкости и будем называть буферную воздушную зону между материалами вентзазором. Слои утеплительного пирога для стен, начиная изнутри:

• отделка;
• вентзазор;
• пароизоляция;
• утеплитель;
• стена.

Вентзазор сохранит отделку сухой, в результате на ней не будет плесени и она прослужит столько, сколько должна.

Подробные сведения о материале

Особенности и свойства

Изоспан d от отечественного производителя «Гекса» представляет собой двухслойный паро-гидроизоляционный материал. Первый слой выполнен из плотного и прочного тканого полипропиленового полотна, а второй слой — это полипропиленовая пленка.

Благодаря такой структуре материал имеет высокую прочность на разрыв и проколы. Кроме того, он не пропускает ни воду, ни пар.

Материал имеет тканую структуру – это обеспечивает его высокой прочностью

Достоинства:

• Долговечность. Материал может прослужить более 50 лет;
• Теплостойкость. Выдерживает как экстремальные морозы, так и высокие температуры;
• Устойчивость к ультрафиолету. Покрытие может длительное время выдерживать воздействие солнечных лучей;
• Эффективность. Наличие ламинированного покрытия позволяет пленке эффективно защищать строительные конструкции от влаги;

Недостатки. Из минусов можно выделить нулевую паропроницаемость, в результате чего Изоспан d применяется только для холодных крыш. Для теплых кровель используют диффузные мембраны, такие как Изоспан АМ.

Материал может применяться только для холодной кровли

Конечно, пленку можно использовать в качестве пароизоляции утепленных кровель, однако это нерационально, так как существует более дешевая серия Изоспан b. Последняя не менее эффективно защищает конструкцию от пара.

Еще один минус — это достаточно высокая стоимость, если сравнивать материал с аналогами от других отечественных производителей.

Характеристики

Изоспан d имеет следующие технические характеристики:

Если вы сравните Изоспан серии «d» и «b», то увидите, что характеристики у обоих материалов практически одинаковые, за исключением прочности, которая у рассматриваемого покрытия в 8-10 раз выше, чем у Изоспан b.

Гидроизоляция Изоспан d может применяться для плоской кровли

Область применения

Изоспан серии d применяется в следующих случаях:

• В качестве гидроизоляции плоской кровли, если сверху планируется утеплитель или цементная стяжка;
• В качестве гидроизоляции наклонной неутепленной кровли;
• Для гидроизоляции цокольного перекрытия;
• В качестве временного покрытия стен или кровли (не более 3-4 месяцев). Пленка при этом способна нести даже снеговую нагрузку;

Гидроизоляцию можно использовать для укладки под стяжку

Для гидроизоляции пола на бетонном основании (под стяжку или лаги).

Стоимость

Для сравнения я привел стоимость Изоспан d, а также цены на аналоги от других производителей:

Конструкция

Компании, выпускающие такие дома, используют материалы с низкой теплоотдачей, применяя инновационные технологии, которые помогают быстро его построить. А также делают его пригодным для круглогодичного проживания и устойчивым к сейсмическим колебаниям.

Конструкция позволяет установить строение на любой подходящей площадке, а если нужно, быстро перевезти его на другое место. Для монтажа мобильного жилья не нужен капитальный фундамент. Их допустимо устанавливать на винтовые сваи, бетонные блоки или на другое жёсткое основание. Некоторые модели можно эксплуатировать на низкорамном полуприцепе, что упрощает их перевозку в случае необходимости. В зависимости от конструкции они бывают такие:

• дома, состоящие из одного блока;
• модульные, состоящие из нескольких блоков;
• трансформеры.

Состоящие из одного блока удобно использовать в качестве дачного домика, бани или сауны. Внутреннее устройство у них зависит от его назначения.

Модульные состоят из отдельных частей собранных в одну конструкцию. Каждая секция выполняет своё назначение и оборудована необходимыми коммуникациями. Готовые модули привозят на строительную площадку и собирают в единую конструкцию.

Интересное техническое решение – самораскладывающиеся мобильные дома, которые выпускает компания «Ten Fold Engineering». В собранном состоянии он помещается в стандартный контейнер и перевозится к месту установки на грузовике. После выгрузки на месте установки достаточно нажать кнопку, чтобы конструкция развернулась в полноценное здание площадью 60 кв. м.

Мобильный дом-трансформер

В такую раскладушку останется занести мебель, так как в нём уже установлены коммуникации и встроены светильники, которые работают от солнечных батарей.

Какой стороной застилать

Довольно часто в качестве пароизоляции в последнее время используется «Изоспан Б». Какой стороной к утеплителю его укладывать, вы должны поинтересоваться перед началом монтажа. На первом этапе потребителю следует определиться с тем, где находится гладкая и шероховатая поверхности. Согласно инструкции, гладкая сторона должна быть обращена к поверхности утеплителя, этому совету необходимо следовать неукоснительно. Мембрана устанавливается на несущие элементы каркаса или на черновую обшивку. Использовать в качестве крепежа при этом необходимо скобы строительного степлера.

Если помещение будет иметь отделочный материал в виде фанеры или вагонки, то «Изоспан В» укрепляется по каркасу деревянными рейками с сечением 4×5 см. Монтажные работы предусматривают плотную стыковку теплоизоляции с пленкой. Если же материал используется в качестве пароизоляции для кровли, то горизонтальные полосы должны укладываться внахлёст, а начинать данные работы необходимо снизу. По горизонтали и вертикали перекрытия должны составить примерно 15 см.

Используется для проведения внутренних работ материал «Изоспан B». Какой стороной к утеплителю укладывать его, вам теперь известно. Однако при монтаже существует множество нюансов, которые необходимо соблюдать. Например, пароизоляция может использоваться при устройстве перекрытий. При этом полотна должны укладываться по потолочным лагам. Располагать материал необходимо между черновым полом и отделочным материалом потолка. Между теплоизоляцией и верхним слоем мембраны, а также между мембраной и чистовым полом следует оставить зазор в пределах до 5 см.

Особенности пароизоляции

Пароизоляционные материалы необходимы для нормальногоциркулирования влаги в помещении. Специальная мембрана в пленке не дает утеплителям накапливать влажность

Поэтому очень важно при укладке слоя соблюдать несколько условий:

Если используется мембрана со свойством ветро- и гидроизоляции, то она должна плотно контактировать с утеплителем. Если будут зазоры, то материал будет остывать до температуры, которая будет ниже, чем у выводимого пара. Тогда мембранная пленка может покрыться тонким слоем льда и перестать быть эффективной.
Необходимо предусмотреть зазор для отвода пара не менее 40-50 мм. Но размер может варьироваться в зависимости от климатических условий

Особенно важно соблюдать баланс для больших крыш или с тупым углом ската, в которых хуже циркуляция воздуха.
Количество пара, проходящего через систему, должно быть минимальным.

Пароизоляция имеет одну важную функцию – она предотвращает попадание влажности на слой утепления. Но это не все, при использовании в домах силикатных или пенополистирольных материалов удерживающих тепло, мембрана будет служить барьером для попадания в дом отдельных волокон и летучих веществ, которые могут навредить здоровью.

Пленки «Изоспан»: впечатляющее многообразие

Отечественная марка «Изоспан» начала выпускать свою продукцию еще в начале 2000-х. Речь идет о бренде известной российской компании Гекса, которая продает свою продукцию сейчас во всех странах СНГ. Но наибольшей популярностью она пользуется, конечно, на родине.

Что немудрено, ведь климатические условия в России таковы, что на протяжении всего года, за исключением всего 3-4 месяцев, температура в доме выше, чем снаружи. А это вызывает такие физические процессы, как постоянное движение воздуха с молекулами воды вверх.

И главная задача пароизоляции – не допустить проникновение этих молекул в утеплитель. Ведь, если климат какого-либо региона более-менее благоприятен, то при высоких наружных температурах происходит естественное испарение этой воды из утеплителя и никто не беспокоится о проблемах сырости или грибка. Если же в регионе есть холодная пора года, тогда вода остается внутри утеплителя и быстро разрушает его изнутри. А вот это уже – проблема.

Вот почему современный выбор пленок для обустройства кровельного пирога – огромен, и каждая из них предназначена для применения в конкретной сфере строительства:

Вот полный обзор всех кровельных пленок, которые выпускает компания Изоспан:

Но отметим один из самых значительных минусов пароизоляционных пленок Изоспан: таковые не подходят для утепления кровли надувным материалом, так как слишком растягиваются при этом и образовывают подушки. В принципе, больше негативных отзывов об Изоспан нет, исключая те случаи, когда покупатели элементарно нарывались на подделку, но об этом позже.

Сейчас мы предлагаем внимательно рассмотреть, какие варианты для крыши предлагает этот производитель и для каких решений. Ведь для каждого из них пароизоляция Изоспан имеет свои технические характеристики и формат:

Основные сведения об Изоспане

Название материала произошло от названия фирмы, которая его производит. Под ним подразумевается несколько совершенно разных по свойствам и назначению полимерных пленок. Всю продукцию этого бренда обычно разделяют на три основных группы:

защищающие от воды и ветра мембраны Изоспан А. Они широко используются в кровельных, а также фасадных работах в качестве защиты элементов конструкции кровли, а также внутренней части вентилируемых фасадов от атмосферных осадков. При этом пленка способна пропускать через себя пар, выводя его наружу. Это свойство таких мембран не дает влаге образовывать конденсат на утеплителе или деталях стропильной системы крыши. Некоторые разновидности имеют огнезащитную обработку. Средняя паропроницаемость определена возле показателя 3500 г/м? за сутки. Нужно сказать сразу, что материал невозможно использовать на кровле, имеющей угол наклона меньше 35?С. Обязательное требование — монтаж должен производиться только при нормальной погоде;

Предназначение Изоспана В — не позволить пару проникнуть из помещения в теплоизоляционный слой и образовать там конденсат

• не пропускающие воду и пар пленки, относятся к линейке Изоспан В. В отличии от своего собрата монтируется внутри помещений. Ведь его задача – не позволить пару проникнуть из помещения в теплоизоляционный слой и образовать там конденсат. Закрытые такой мембраной плиты утеплителя, всегда остаются сухие, что предохраняет их от образования налета плесени и грибковых колоний. Инструкция по применению Изоспана Bбудет изложена более подробно;
• Изоспан С призван не только защищать слой утеплителя от ветра, повышенной влажности и пара, но и создавать дополнительный утеплительный эффект за счет специального покрытия, которое способно отражать инфракрасные лучи. Это сильно снижает энергопотребление жилища, создавая хорошую экономию средств на отопление. Обладает структурой, состоящей из двух слоев. Один слой всегда гладкий, а другой шероховатый, что лучше держит конденсат. Материал очень водоупорный, более 1000 мм. вод. ст. Его сопротивление проникновению пара составляет 7,0 Па/мг.

Технические характеристики пленок Изоспан:

Паропроницаемые мембраны ИЗОСПАН
Марка	Плотность, гр/м?	Состав	Разрывная нагрузка продольная/поперечная, Н/5см	Паропроницаемость, гр/м?/сут, не менее	Водоупорность, мм.вод.ст., не менее
А	110	100% пп	177/129	1000	250
АМ	90	110/90	850	880
AS	115	165/120	1000	1000
Паро-гидроизоляция ИЗОСПАН
Марка	Плотность, гр/м?	Состав	Разрывная нагрузка продольная/поперечная, Н/5см	Сопротивление паропроницанию, м?чПа/мг, не менее	Водоупорность, мм. вод.ст., не менее
B	70	100% пп	128/104	7	1000
C	90	197/119
D	105	1068/890
DM	105	560/510
Отражающая паро-гидроизоляция ИЗОСПАН
Марка	Плотность, гр/м?	К теплового отражения, %	Разрывная нагрузка продольная/поперечная, Н/5см	Сопротивление паропроницанию, м?чПа/мг, не менее	Водоупорность, мм.вод.ст., не менее
FB	132	90	330/310	паронепроницаемый	водонепронецаемый
FD	800/700
DS	92	120/80
Марка	Толщина, мм	К теплового отражения, %	Разрывная нагрузка продольная/поперечная, Н/5см	Сопротивление паропроницанию, м?чПа/мг, не менее	Водоупорность, мм.вод.ст., не менее
FX	2-5	90	176/207	паронепроницаемый	водонепронецаемый

Все перечисленные разновидности при своих отличиях, обладают рядом положительных, общих для них качеств:

• они удобны в монтаже и поставляются в рулонном виде;
• не боятся ультрафиолетового излучения;
• не пропускают влагу;
• их стоимость вполне подходит каждому, кто занимается строительством или утеплением своего жилья.

Далее подробно рассмотрим инструкцию по применению Изоспана B и его технические и качественные характеристики, так как именно эта разновидность мембран пользуется наибольшим спросом, благодаря очень удачному сочетанию потребительских свойств и цены.

Использование полимерных пленок в обустройстве крыши повышает её надёжность и долговечность

Виды пароизоляции Изоспан

Все современные паробарьеры являются универсальными для использования на различных поверхностях. Отличаются они лишь своими свойствами: прочностью, водоупорностью, устойчивостью к ультрафиолету, паропроницаемостью.

Выделяют такие виды Изоспана от производителя ООО «Гекса»:

Паропроницаемые мембраны для защиты от ветра и влаги Изоспан:

•  А;
• АМ;
• АS;
• АQ proff;

Плотность от 110 г/м2 до 120 г/м2.

Данный вид используют для наружных работ (при утеплении крыш и стен). Он не дает скапливаться влаге под кровлей, позволяя конденсату свободно испаряться. Структура материала с одной стороны обладает эффектом, отталкивающим воду, а с другой стороны имеет шероховатую поверхность. Эта особенность способна продлить срок службы слоя утеплителя и самой конструкции на многие годы. Диффузионная мембрана Изоспан выполнена из полипропилена, который не оказывает на человека негативного влияния. Также продукт не подвержен появлению плесени и любых грибков.

Применяются мембраны в таких случаях:

• утепление чердаков и крыш;
• обшивка сайдингом стен невысоких домов;
• строительство каркасных сооружений;
• в качестве вентиляции наружного утеплителя в высотках.

На крышу рекомендуют стелить мембраны под углом не меньше 35 градусов.

Гидроизоляционные и пароизоляционные пленки Изоспан:

• В;
• С;
• D;
• DМ;
• RS
• RМ;

Плотностью от 72 г/м2 до 100 г/м2.

Двухслойный материал применяется для защиты, как деревянных, так и металлических конструкций от негативного влияния воды и влаги. Пленка Изоспан обработана специальным водоотталкивающим средством, что дает возможность использовать ее как дополнительную прослойку при заливке пола цементом. Изоспан на пол стелется мягкой стороной поверх утеплителя.

Ленты (RM и RS имеет дополнительный третий слой, что позволяет применять их в качестве гидропароизоляции в перекрытиях между этажами).

Назначение пароизоляционных пленок следующее:

• обустройство внутренних стен;
• защита пола от повышенной влажности;
• изоляция утеплителя крыши внутри помещений;
• монтаж напольных покрытий.

Парогидроизоляционные и теплозащитные материалы с эффектом энергосбережения: изоспан fd, изоспан fs, изоспан fb и fх плотностью от 90 г/м2 до 175 г/м2.

Полотна обладают высокими пароизоляционными свойствами, что дает возможность быстрее прогревать помещение и экономить на его отоплении зимой.

Изоспан fb и fd сделаны из крафт-материала и лавсана, в результате чего имеют повышенную прочность и могут сберегать свои характеристики при температуре до +140 градусов.

Фольгированный изоспан обладает отражающими свойствами, которые позволяют снизить утраты тепла. Главное помнить, как правильно укладывать материал на кровле: метализированная сторона должна быть обращена внутрь дома. Пленки по размеру рулона крепятся на потолок встык и склеиваются специальным скотчем.

Данный вид утеплителя применяют в таких случаях:

• изоляция кровель;
• обшивка стен в условиях повышенных температур;
• прокладка теплого пола.

Разные виды продукции подходят для утепления любых поверхностей. Характеристики Изоспан  получили хорошие отзывы от пользователей

Укладывать материал не сложно, но важно соблюдать правила монтажа. На упаковке указана информация по установке изоляции, как правильно укладывать ее на стены, пол и крышу

Вот некоторые правила, которых следует придерживаться:

• ветровлагозащитная мембрана должна плотно прилегать к утеплителю с небольшим заступом по краям;
•  Изоспан АQ АS и АМ нужно крепить внахлест (до 15 см) белой поверхностью к утеплителю;
• стыки паропроницаемой мембраны фиксируются липкой лентой, а по краям скрепляется степлером;
• двухслойный Изоспан при использовании на кровле и стенах клеится гладкой стороной на минеральную вату или другой утеплитель, а шероховатой – внутрь дома. При монтаже пола все делается наоборот.

Изоспан B, C, D, DM, RM, RS

Производитель предлагает широкий спектр материалов, которые служат пароизоляцией и гидроизоляцией.

Все виды Изоспана различаются по плотности и функциональному назначению:

• Изоспан В (показатель плотности 72 г/м2). Пароизоляция Изоспан В входит в число наиболее популярных видов материала за счет характеристик и доступной цены. С его помощью пароизолируются внутренние стены, потолок с цокольными и межэтажными перекрытиями, мансарды и чердаки под утепленной крышей.
• Изоспан С (90 г/м2). Пленкой гидроизолируются бетонные полы. Материал укладывается для защиты теплоизолятора на скатных крышах.
• Изоспан D, DM (105 г/м2). Изоспан Д и ДМ – разновидности материала повышенной прочности. Марка ДМ имеет антиконденсатную поверхность. Изоспан D, DM рассчитан на высокие нагрузки. Изоспан Д и ДМ в первую очередь используется для гидроизоляции плоской или скатной крыши. Материал подходит для эксплуатации в качестве временного кровельного покрытия. Также Изоспан D поможет решить вопросы с бетонным полом или цокольным перекрытием, если конструкции требуют надежной защиты от влаги.
• Изоспан RS (84 г/м2), RM (100 г/м2). Как и Изоспан Д, эти разновидности пленки характеризуются высокой прочностью. В частности, она достигается за счет трехслойной структуры Изоспана RS и RM – в середине расположена полипропиленовая сетка. Применение Изоспана RS и RM – обустройство гидро- и пароизоляции для потолка, стеновых конструкций, полов, перекрытий, для кровли любого типа.

Изоспан D, как и другие представители группы, имеет два внешних слоя с разными функциями. Одна из поверхностей гладкая, вторая – шероховатая и волокнистая. Шероховатость внешней стороны способствует свойствам материала удерживать и рассеивать по поверхности оседающий пар и конденсат, давая ему быстро испариться.

Полотна высокой прочности (Изоспан D, Изоспан RS, RM) в процессе изготовления обрабатываются водоотталкивающими составами. Гидрофобный материал подходит для использования в качестве гидроизоляционной прослойки в ходе монтажа земляных полов, цементных стяжек по бетонному основанию во влажных помещениях.

Монтируя пароизоляцию, укладывать Изоспан требуется гладкой поверхностью к утепляющему материалу. В зависимости от условий эксплуатации конструкции, может потребоваться предусмотреть вентиляционный зазор в 40–50 мм, обеспечивающий выветривание влаги.

инструкция по применению для пола в деревянном доме

Содержание

1. План монтажа
2. Для мансард и чердачных перекрытий
3. Для межэтажных перекрытий
4. Для внутренних стен дома, межкомнатных перегородок
5. Использование для стен со стороны помещения
6. Подготовка к монтажу гидропароизоляционного слоя
7. Характеристики Изоспана
8. Подробные сведения о материале
9. Особенности и свойства
10. Характеристики
11. Область применения
12. Стоимость
13. Сфера использования
14. Выбор паробарьера
15. Цель проведения пароизоляционных работ
16. Изоспан В: описание и применение
17. 1 Разновидности и отличия
18. 1.1 Изоспан AQ Proff
19. 1.2 Изоспан AS и Изоспан AM
20. 1. 3 Изоспан A и А-ОЗД
21. Использование материала при утеплении мансард
22. Как правильно стелить пароизоляцию
23. Выполнение работ по укладке пароизоляционной мембраны
24. В чем отличие между гидро- и пароизоляцией
25. Влажная древесина и вредоносные грибки
26. Применение материалов Изоспан В
27. Цель проведения пароизоляционных работ

План монтажа

Монтаж Изоспана В имеет особенности в зависимости от того, какой элемент строения необходимо защитить.

Для мансард и чердачных перекрытий

Схема монтажа представлена на рисунке 1.

Сначала нужно развернуть рулон, нарезать ленты по размеру. Чтобы определить, какой размер полотнищ наиболее удобен и экономичен для монтажа, необходимо провести обмер и разметку стен и потолков. Затем нужно приложить первую ленту к внутреннему утеплителю мансарды или чердака (со стороны потолка) гладкой стороной и закрепить.

Способ крепления выбирают такой, какой удобнее самому владельцу: можно крепить строительным степлером или на гвозди. Первую ленту в мансардах необходимо укладывать снизу, параллельно полу. Для удобства ленты можно свернуть в трубки нужной стороной внутрь и разворачивать по мере закрепления.

Далее нужно закрепить следующие ленты аналогичным образом, накладывая на предыдущую с перекрытием около 15 см. Загерметизировать стыки специальной лентой типа Изоспан KL, KL+ и смонтировать на покрытии обрешетку для облицовки или отделочного материала. Для вентиляции и испарения возможного конденсата зазор между Изоспаном В и облицовкой должен составлять 50 мм.

Для межэтажных перекрытий

Схема монтажа представлена на рисунке 2:

Монтаж происходит следующим образом:

• развернуть рулон и нарезать ленты по размеру;
• закрепить первую ленту шершавой стороной к черновому потолку (полу) с помощью степлера или гвоздей;
• закрепить остальные ленты параллельно первой, с перекрытием на 150 мм;
• заклеить стыки для герметизации соответствующей лентой семейства Изоспан;
• смонтировать обрешетку и уложить утеплитель.

Далее понадобится уложить еще один слой Изоспана В гладкой стороной к утеплителю, закрепить его к обрешетке и загерметизировать стыки.

Для внутренних стен дома, межкомнатных перегородок

Схема представлена на рисунке 3.

Монтаж выполняется аналогично варианту с межэтажными перекрытиями, при этом ленты укладываются, начиная снизу, параллельно полу, также гладкой поверхностью к утеплителю.

Для защиты конструкций каркасных перегородок и стен внутри зданий вместо типа В можно применять Изоспан c обозначениями C, DM, RS. Монтаж этих материалов выполняется по тем же правилам.

Пароизоляция Изоспан считается одной из самых надежных и долговечных. Материал полностью не токсичен и безопасен, и активно применяется в строительстве. Рассмотрим более подробно характеристики Изоспан B, инструкцию по его применению и монтажу.

Использование для стен со стороны помещения

Чаще всего этот пароизолятор применяется при утеплении именно вертикальных стен, ограждающих конструкций изнутри. Далее обсудим во всех подробностях, каким образом в этом случае устанавливается «Изоспан В». Инструкция по применению для стен его такова:

• Сначала на поверхность крепится брус, ширина которого равна (или чуть больше) толщине утеплителя. При использовании для чистовой обшивки гипсокартона может применяться металлический профиль.
• Далее устанавливаются плиты минваты или пенополистирола.
• Поверх них — на бруски, рейками или степлерами — закрепляется пароизолятор «Изоспан В».
• Далее монтируется чистовая отделка.

Подготовка к монтажу гидропароизоляционного слоя

Монтаж Изоспана В предполагает проведение ряда подготовительных работ. В целом, пирог пола в деревянном доме представляет собой следующую конструкцию:

• черновое основание;
• лаги из дерева;
• слой теплоизоляции;
• гидроизоляция;
• пол чистовой;
• финишное покрытие.

Не стоит нарушать технологию монтажа деревянного пола, потому что в противном случае конструкция получится ненадежной. Весь пирог в идеале должен опираться на кирпичные или бетонные опоры, а между грунтом и деревянным полом имеется небольшой вентилируемый участок. Пароизоляция должна укладываться сразу же при строительстве дома, не нужно откладывать этот этап «на потом».

Пароизоляция надежно защитит от влаги и конденсата

Подготовка перед укладкой пароизоляционной мембраны заключается в следующем. Для начала все деревянные части пирога пола обрабатываются специальным защитным составом, который позволит дереву на максимально длительный срок приобрести иммунитет к гнили и грибку. Особого внимания должны быть удостоены деревянные лаги и пол черновой, на который как раз и будет укладываться мембранный материал.

Лента соединительная (скотч) Изоспан FL

Характеристики Изоспана

Он относится к отряду строительных пленок, предназначенных для защиты от влаги. Такая мембрана для пола в деревянном доме будет служить как гидроизоляция для пола, а также пароизоляционный материал.

Вот некоторые преимущества такого материала:

• Высокая прочность.
• Абсолютная водоотталкиваемость, которая не теряется с течением времени.
• Возможность использования как при низких температурах (-60ºС), так и при высоких (+80ºС).
• Простота укладки.
• Большой срок эксплуатации (50 лет гарантии).
• Экологичность.
• Защита от сырости и грибка.
• Приемлемая цена.

К недостаткам можно отнести:

• Низкая огнестойкость.
• Необходимость быть осторожным при монтаже, так как из-за неаккуратных и резких движений, мембрана может порваться.

Подробные сведения о материале

Особенности и свойства

Изоспан d от отечественного производителя «Гекса» представляет собой двухслойный паро-гидроизоляционный материал. Первый слой выполнен из плотного и прочного тканого полипропиленового полотна, а второй слой — это полипропиленовая пленка.

Благодаря такой структуре материал имеет высокую прочность на разрыв и проколы. Кроме того, он не пропускает ни воду, ни пар.

Материал имеет тканую структуру – это обеспечивает его высокой прочностью

Достоинства:

• Долговечность. Материал может прослужить более 50 лет;
• Теплостойкость. Выдерживает как экстремальные морозы, так и высокие температуры;
• Устойчивость к ультрафиолету. Покрытие может длительное время выдерживать воздействие солнечных лучей;
• Эффективность. Наличие ламинированного покрытия позволяет пленке эффективно защищать строительные конструкции от влаги;

Недостатки. Из минусов можно выделить нулевую паропроницаемость, в результате чего Изоспан d применяется только для холодных крыш. Для теплых кровель используют диффузные мембраны, такие как Изоспан АМ.

Материал может применяться только для холодной кровли

Конечно, пленку можно использовать в качестве пароизоляции утепленных кровель, однако это нерационально, так как существует более дешевая серия Изоспан b.

Еще один минус — это достаточно высокая стоимость, если сравнивать материал с аналогами от других отечественных производителей.

Характеристики

Изоспан d имеет следующие технические характеристики:

Если вы сравните Изоспан серии «d» и «b», то увидите, что характеристики у обоих материалов практически одинаковые, за исключением прочности, которая у рассматриваемого покрытия в 8-10 раз выше, чем у Изоспан b.

Гидроизоляция Изоспан d может применяться для плоской кровли

Область применения

Изоспан серии d применяется в следующих случаях:

• В качестве гидроизоляции плоской кровли, если сверху планируется утеплитель или цементная стяжка;
• В качестве гидроизоляции наклонной неутепленной кровли;
• Для гидроизоляции цокольного перекрытия;
• В качестве временного покрытия стен или кровли (не более 3-4 месяцев). Пленка при этом способна нести даже снеговую нагрузку;

Гидроизоляцию можно использовать для укладки под стяжку

Для гидроизоляции пола на бетонном основании (под стяжку или лаги).

Стоимость

Сфера использования

В холодное время года разница температур в жилом помещении и на улице бывает очень большой. В результате пары влаги, всегда присутствующие в воздухе комнат, конденсируются на ограждающих конструкциях, а если они утеплены – то непосредственно на изоляторе. В результате минеральная вата, стекловата и т. д. намокают и теряют большую часть своих утепляющих свойств. Чтобы этого не происходило, и используются пароизоляционные мембраны. Этот материал устанавливается поверх утеплителя со стороны помещения и препятствует проникновению в него влаги.

Мембрана «Изоспан В», инструкция по применению («С», кстати, — разновидность, используемая примерно так же, и в тех же случаях) которой практически идентична таковой у прочих видов теплоизолятора, может устанавливаться при утеплении:

• «пирога» мансард, чердаков, а также кровель снаружи,
• стен изнутри и со стороны улицы,
• перекрытий — чердачных и мансардных,
• пола.

Использовать этот материал можно при утеплении зданий любого назначения и любой этажности. Отлично подходит «Изоспан В» для защиты от влаги таких видов утеплителя, как минеральная вата, пенополистирол, пенополиуретановые покрытия и т. д.

Выбор паробарьера

В процессе обустройства перекрытий и других ограждающих конструкций деревянного дома необходимо выбрать и купить тот или иной тип паробарьерной пленки. Учитывая разнообразие видов и предложений на рынке, возникает закономерный вопрос: «какая пароизоляция лучше?». Ответ на него не может быть однозначным, поскольку правильный выбор делается только исходя из соответствия следующим требованиям:

• Во-первых, технические характеристики самой пароизоляции.
• Во-вторых, эксплуатационные характеристики помещения или ограждения, где будет организован паробарьер, и их соответствие предыдущему пункту.
• В-третьих, стоимость самой пленки.
• В-четвертых, объемы и цена монтажных работ (ранее уже упоминалось, что полиэтиленовые/пропиленовые пленки по руководству требуют вентиляционного зазора, что усложняет монтаж деревянного пола).

Практические рекомендации по монтажу

Укладку пола лучше вести на поперечные балки – лаги. При этом само перекрытие будет иметь шаровую структуру – такой себе разношерстный «пирог Наполеон». Схема слоев имеет следующий вид:

1. Лаги и черепные бруски. Первые используются как поддержка и крепежные балки для основного покрытия, а также обеспечения требуемой жесткости. Вторые укладываются по обе стороны каждого лага, чтобы гарантировать зазор досок или плит чернового пола от земли/фундамента.

2. Первичный слой перекрытия. Размещается на ранее упомянутые бруски. Может организовываться из досок или плит (например, ОСБ).

3. Гидроизоляция. Первый барьерный слой, который предотвращает проникновение воды внутрь «пирога» снизу. Отдельные элементы рулона укладываются внахлест (150–200 мм), а соединение происходит с помощью двухстороннего скотча.

4. Утеплитель. Чаще всего используется минеральная вата, стекловолокно или пенопласт требуемой толщины. Отдельные листы размещают таким образом, чтобы между ними и лагами не оставался зазор.

5. Пароизоляция. Принцип монтажа такой же, как и в случае с гидробарьером.

6. Контррейки. Продольные деревянные бруски высотой 10–20 мм, которые обеспечивают гарантированный вентиляционный зазор. Если в качестве последней используется диффузная мембранная пленка, то их можно и не устанавливать.

7. Деревянный пол. Это этап может быть финальным или промежуточным, в случае, если предвидится, к примеру, укладка ламината.

Расценки

Цена пароизоляции на рынке России зависит от ее типа, характеристик и региональных особенностей/ставок:

Цель проведения пароизоляционных работ

Строения из дерева очень предрасположены действию влаги. От нее древесина может набухнуть и покоробиться. Пол — это место, какое может контактировать с влагой по двум сторонам. Влажность грунта, а еще регулярно меняющийся климат помещения плохо оказывает воздействие на пол строения.

В кухнях и ванных помещениях нередко может проливаться вода на пол, хотя влажность данных комнат итак всегда высокая. Такое двухстороннее бомбардирование влагой может в сжатые сроки разрушить основание или привести к образованию плесени или грибка в доме.

Ввиду этого целесообразна гидро и пароизоляция пола в доме из дерева. Благодаря подобному материалу для строительства как Изоспан для пола, можно качественно обезопасить древесину от проникновения влаги и возникновения конденсата.

Изоспан В: описание и применение

Для предотвращения попадания влаги и водяных паров в утеплительные покрытия и стены из внутренних объемов дома применяется Изоспан В. Его структура позволяет создать своеобразный барьер для пара: поверхность для сбора и обеспечения постепенного испарения конденсата. Еще одно свойство Изоспана В — защита воздуха в доме от проникновения в него частиц из утеплителя и материалов стен.

Областью применения являются:

• внутренние поверхности стен и потолков в мансардных помещениях и чердачных перекрытий;
• внутренние поверхности стен жилых комнат из любого материала;
• поверхности межэтажных и цокольных перекрытий.

1 Разновидности и отличия

Все изоляционные пленки Изоспан, производящиеся компанией «Гекса», в зависимости от функционального назначения делятся на четыре основные категории.

Паропроницаемые пленки для гидроизоляции и ветрозащиты подобно мембранам Изоспан А. В данную группу входят материалы, использующиеся в качестве изоляционного слоя, защищающего утеплитель и стены дома от поступающей с окружающей среды влаги и ветра.

Особенностью данных пленок является способность к пропусканию пара, что делает их оптимальным вариантом для применения при теплоизоляции деревянных, либо газосиликатных домов – стены которых обладают способностью к естественной циркуляции воздуха сквозь микропоры, и вентилируемых фасадов.

Паропроницаемая гидроизоляция Изоспан решает проблему образования конденсата, так как пары влаги не скапливаются на поверхности мембраны, и свободно испаряются в окружающую среду.

К данному классу мембран производитель относит следующие изделия.

1.1 Изоспан AQ Proff

AQ Proff – это трехслойная мембрана как отражающие теплоизоляционные материалы, которая относится к классу высокоэффективных, профессиональных гидроизоляционных материалов. Это оптимальный вариант для защиты кровли, и фасада кирпичных, либо деревянных домов, от ветра и влаги.

Профессиональная гидроизоляция AQ Proff

Пароизоляция AQ Proff, как свидетельствует инструкция, не требует наличия вентиляционного зазора, что значительно упрощает её монтаж, так как отпадает необходимость в обустройстве дополнительной обрешетки. Применение Изоспана AQ Proff – предельно простое, материал просто закрепляется поверх утеплителя с помощью строительного степлера, после чего теплоизоляция покрывается облицовочным покрытием.

Технические характеристики мембраны AQ Proff:

• Индекс паропроницаемости – 1000 δ;
• Водоупорность – 1000 мм. вод. ст.;
• Сопротивление продольному растяжению – 330 Н/50 мм, поперечному – 180 Н/50 мм.

Производитель мембраны AQ Proff – компания «Гекса» заявляет, что мембрана способна выдержать около 12 месяцев под прямым воздействием солнечных лучей, без потери функциональных характеристик.

В комплекте с мембраной идет инструкция, калькулятор для расчета теплоизоляции трубопроводов, сертификат пожарной безопасности и сертификат соответствия Росстроя.

1.2 Изоспан AS и Изоспан AM

Влаго- и ветрозащитные мембраны без эффекта пароизоляции Изоспан AS и AM имеют схожие технические характеристики. Данные виды пленок отличаются лишь максимальной устойчивостью к растяжению, которая у мембран AM составляет 160/100 Н/50 мм в продольном и поперечном напряжении, а у пленки AS 190/110 Н/50мм, соответственно.

Функциональное назначение обеих мембран идентично – гидроизоляция материалов для утепления, устанавливающихся на поверхности стен, кровли и фасадов, требующих протекания естественного парообмена.

Технические характеристики мембран Изоспан AS и AM  следующие: индекс паропроницаемости — 880 δ; водоупорность – 1000 мм. вод. ст, стабильность свойств под прямым воздействием УФ лучей – 3-4 месяца;

Использование мембран Изоспан для защиты минваты от влаги

1.3 Изоспан A и А-ОЗД

Виды гидроизоляционных мембран Изоспан А и Изоспан А-ОЗД отличаются наличием в составе сырья для изготовления пленки А-ОЗД огнеупорных примесей (как у ветрозащитных мембран Изоспан), благодаря которым она получила сертификат пожарной безопасности РП – 1 (материал, не распространяющий горение).

Сфера применения утеплителя Изоспан А-ОЗД – защита от влаги вентилируемых фасадов. Функциональное назначение пленки Изоспан А более широкое – помимо фасадов она может применяться как в качестве гидроизоляционного слоя в каркасных стенах, так и для кровли, и фасадов с внешним утеплением.

Температурный режим для нормальной эксплуатации для обеих мембран составляет от -60 до +80 градусов, стабильность свойств, при прямом воздействии УФ лучей – 3-4 месяца.

Устойчивость к растяжению у обеих пленок идентична, она составляет 190 Н/50мм при продольном, и 140 Н/50мм при поперечном растяжении.

Пленки класса А и А-ОЗД отличает высокий индекс паропроницаемости, который составляет 1800 δ и 2000 δ, что позволяет мембранам эффективно выводить влагу, водяной пар и конденсат в атмосферу. Водоупорность мембран составляет 300 мм. вод. ст,

Использование материала при утеплении мансард

В этом случае предварительно между стропилами вставляются плиты самого утеплителя. Далее натягивается «Изоспан В». Инструкция по применению (стены мансарды, не изолированные с помощью пленки этого вида, качественно утеплить, как вы поняли, невозможно) в этом случае такова:

• Фиксируют «Изоспан» прямо на стропила. Обычно крепление производится брусками толщиной в 3-5 см, набитыми вдоль ног сверху. Иногда используются и тонкие прижимные планки (по две). В этом случае «Изоспан В» фиксируется по обеим сторонам каждого стропила. Второй способ также достаточно надежен. К тому же при его использовании экономится площадь мансарды. Однако крепить материал таким образом можно только тогда, когда толщина стропильных ног хотя бы на 2-3 см больше толщины плит утеплителя.
• Поверх натянутого пароизолятора монтируется чистовая отделка (вагонка, гипсокартон, обрезная доска, фанера и т. д). Крепят ее при первом способе фиксации «Изоспан В» на бруски. При втором – на стропила. В результате между чистовой отделкой и пароизолятором образуется вентиляционный зазор, что обеспечивает быстрое просыхание осевшего конденсата.

Как правильно стелить пароизоляцию

Вопрос о том, какой стороной класть пароизоляцию к утеплителю, зависит от рекомендаций производителя. Если на упаковке четко указано, какая сторона должна быть обращена в сторону конструкции, а какая – внутрь помещения, необходимо следовать инструкции. Если маркировки нет или упаковка нарушена, стоит учитывать общие правила монтажа.

В первую очередь принимается во внимание положение «точки росы»

Теплый воздух изнутри здания стремится выйти наружу, в более холодную уличную атмосферу (большую часть года), причем внутренние конструкции сравнительно легко передают тепло. Доходя до утеплителя, тепловой поток постепенно рассеивается, тепло поглощает рыхлая масса теплоизоляционного материала. Если снаружи утеплитель защищен от атмосферной влаги гидроизоляционной пленкой, то вопрос о том, какой стороной класть пароизоляцию на крышу, решается так, как показано на иллюстрации выше – между стропилами и утеплителем, шероховатой или отражающей поверхностью внутрь дома. Для материалов с одинаковыми сторонами (обе гладкие) производитель не дает каких-либо советов относительно укладки – пленку можно разворачивать к стропилам любой стороной. Обычно в таком случае принято прибивать пленку непосредственно к стропилам скобами, соответственно, лучше выбрать материал повышенной прочности. Он не будет провисать в промежутках между стропилами, не порвется под весом утеплителя.

Решая, какой стороной укладывать пароизоляцию на чердаке изнутри, следует с учетом информации о том, отапливается помещение или нет. Для отапливаемого пленка укладывается с внутренней стороны стропил так, чтобы между утеплителем и пленкой оставался зазор в 10…15 мм отражающей стороной внутрь помещения. Если крыша сильно нагревается, и влага конденсируется с внешней стороны, можно развернуть пленку наоборот. В этом случае удобно использовать материал с шероховатой поверхностью для конденсации влаги.

В случае устройства парового барьера в помещении вопрос, какой стороной класть пароизоляцию на потолок, решается так: для обычных помещений отражающая или шероховатая сторона разворачивается внутрь комнаты, для помещений над жаркими и влажными помещениями (например, комната отдыха над парилкой) – наоборот. То же касается и пола. Непроницаемые для пара пленки монтируются произвольно.

Для стен используется общий принцип – нужно задержать тепло внутри помещения. Поэтому паровой барьер устраивается изнутри и обычно с помощью плотных, не пропускающих пар, армированных полиэтиленовых пленок. Здесь вопрос о том, какой стороной крепить пароизоляцию к стене, не принципиален – пленки одинаково удерживают тепло и влагу вне зависимости от стороны крепления.

Выполнение работ по укладке пароизоляционной мембраны

В работе по устройству пароизоляции Изоспаном деревянного пола нет ничего сложного. Однако если вы не занимались подобным видом работ ранее – лучше доверить укладку мембранного материала специалистам.

В принципе в сооружении гидропароизоляционного слоя возможно применять любые пленочные материалы, но наибольшую эффективность даст пароизоляция деревянной поверхности Изоспаном.

Изолятор ровно выкладывается поверх чернового основания, при этом все стыки тщательнейшим образом проклеиваются специальной лентой

Мембрана выкладывается на несущий каркас и при выкладке важно следить за тем, чтобы полотнища материала ложились друг на друга внахлест. Нахлест рекомендуется делать примерно в пятнадцать-двадцать сантиметров. Укрепить выложенный слой на поверхности возможно обычными строительными гвоздями из оцинкованной стали или же строительным степлером

Однако производители Изоспана советуют использовать в качестве крепежа специальную ленту

Укрепить выложенный слой на поверхности возможно обычными строительными гвоздями из оцинкованной стали или же строительным степлером. Однако производители Изоспана советуют использовать в качестве крепежа специальную ленту.

Не менее важно уложить изолятор правильной стороной. Если сторона будет выбрана неверно – в слое утеплителя начнет копиться влага, которая будет портить материал и снижать его полезные качества. Слой мембранного изолятора монтируется на слой утеплителя и все стыки и щели в обязательном порядке заклеиваются скотчем

Слой мембранного изолятора монтируется на слой утеплителя и все стыки и щели в обязательном порядке заклеиваются скотчем.

Поверх изолятора укладывается еще один тонкий слой утеплителя. В качестве утеплителя для этого слоя можно применять минвату, пенопласт или изолирующий стройматериал с хорошими теплоизолирующими показателями.

В обустройстве гидропароизоляции деревянных поверхностей можно применять и Изоспан с фольгированным слоем, он будет одновременно выполнять роль теплоизолятора

В чем отличие между гидро- и пароизоляцией

Пароизоляция представляет собой тонкую пленку, которая монтируется внутри пирога пола. Однако довольно часто ее путают с гидроизоляцией, но это – совершенно разные материалы. Итак, гидроизоляционный слой предназначен для того, чтобы не пропускать влажность в помещение снаружи. Если вода все-таки доберется до утеплителя, то его характеристики значительно ухудшатся – он перестанет сохранять тепло. Особенно это будет ощущаться в зимний период, когда вода внутри утепляющего слоя превратится в кристаллики льда. Пол станет холоднее, да и в целом в помещении находиться будет уже не так комфортно. Чтобы этого не произошло, необходимо укладывать слой гидроизоляции. В целом, он не пропускает через себя осадки, грунтовые воды и укладывается снаружи пирога пола.

Гидроизоляция пола по грунту

Пароизоляция укладывается внутри пирога пола. И она будет защищать материалы, входящие в структуру основания, уже не от влаги извне, а от поступающей изнутри помещения – конденсата, формирующегося благодаря дыханию, готовке пищи и другим процессам, сопровождающимся выделением пара и влаги.

Схема устройства пола по балкам

Основное же отличие этих двух типов материалов заключается в их структуре. Гидроизоляционные покрытия не пропускают влагу, но вполне способны пропустить через себя испарения. А вот пароизоляционные удерживают и влагу, и пар, тем самым защищая утеплитель. Таким образом, пароизоляция не имеет как таковой мембранной структуры.

Уложенная на пол пароизоляция

Влажная древесина и вредоносные грибки

Не секрет, что древесина очень быстро атакуется плесневыми грибами, если она всегда пребывает в мокром состоянии. Дерево перестает быть достаточно прочным уже спустя несколько месяцев. Если запустить процесс и игнорировать его в течение пары лет, грибок будет распространяться, и материал станет трухой. Самое главное условие для развития плесени – оптимальные объемы влаги. Следовательно, для сохранности пола вашего жилища в оптимальном состоянии в течение долгого времени его требуется оберегать от повышенной влажности.

Абсолютная влажность только что срубленных хвойных деревьев составляет около 90%, сруба перед монтажом – от 25 до 35%. Что касается пола из дерева, его абсолютная влажность при нормальных условиях на протяжении года держится на уровне 10-20% – все связано с текущим временем года. Стоит сказать, что грибок начинает свою деятельность, когда влажность поднимается до 22%, а это лишь на пару процентов больше максимального естественного состояния дерева. К слову, данная среда также оптимальна для того, чтобы бревно облюбовал жук-древоточец.

При постоянной повышенной влажности дерево потеряет прочность, начнут появляться плесень и грибок

Если в дереве будет слишком много воды, оно начнет гнить.

Применение материалов Изоспан В

Пленка пароизоляционная марки В применяется в таких строительно-монтажных работах:

• теплоизоляция наклонных кровель и чердаков;
• утепление внутренних и каркасных стен зданий;
• обустройство цокольных этажей и межэтажных перекрытий.

При утеплении крыши для кровли Изоспан В защищает теплобарьер и внутренние элементы сооружения от влаги, которая может образоваться внутри помещения . В свою очередь, внутреннее пространство защищается от попадания в него волокнистых частей утеплителя.

Применение пароизоляции изоспан b для стен внутри конструкции обусловлено необходимостью защиты межкомнатных перекрытий от парообразования.

В чердачных конструкциях для потолка марку В используют как влагоизолятор в перекрытиях между этажами. Материал совместим со всеми видами утеплителей. Монтируется между балками потолка по обеим сторонам теплобарьера.

Для пола пароизоляция данной модели служит в качестве защитного слоя между цементной стяжкой и паркетным покрытием.

Цель проведения пароизоляционных работ

Деревянные сооружения очень подвержены воздействию влаги. От нее древесина может разбухнуть и покоробиться. Пол — это место, которое может соприкасаться с влагой по обе стороны. Влажность грунта, а также постоянно меняющийся микроклимат помещения негативно влияет на пол здания.

В кухнях и ванных комнатах часто может проливаться вода на пол, хотя влажность этих комнат итак всегда высокая. Такое двухстороннее бомбардирование влагой может очень быстро разрушить основание или привести к появлению плесени или грибка в доме.

Ввиду этого целесообразна гидро и пароизоляция пола в деревянном доме. Благодаря такому строительному материалу как Изоспан для пола, можно качественно защитить древесину от попадания влаги и появления конденсата.

технические характеристики, инструкция по применению своими руками, видео и фото

Что представляет собой Изоспан Д? Какими характеристиками обладает и для каких целей вообще применяется данная пленка? Я работал с этим материалом, и готов подробно ответить вам на все эти вопросы.

На фото Изоспан D — это прочная и долговечная гидроизоляционная пленка от отечественного производителя

Подробные сведения о материале

Особенности и свойства

Изоспан d от отечественного производителя «Гекса» представляет собой двухслойный паро-гидроизоляционный материал. Первый слой выполнен из плотного и прочного тканого полипропиленового полотна, а второй слой — это полипропиленовая пленка.

Благодаря такой структуре материал имеет высокую прочность на разрыв и проколы. Кроме того, он не пропускает ни воду, ни пар.

Материал имеет тканую структуру – это обеспечивает его высокой прочностью

Достоинства:

• Долговечность. Материал может прослужить более 50 лет;
• Теплостойкость. Выдерживает как экстремальные морозы, так и высокие температуры;
• Устойчивость к ультрафиолету. Покрытие может длительное время выдерживать воздействие солнечных лучей;
• Эффективность. Наличие ламинированного покрытия позволяет пленке эффективно защищать строительные конструкции от влаги;

Недостатки. Из минусов можно выделить нулевую паропроницаемость, в результате чего Изоспан d применяется только для холодных крыш. Для теплых кровель используют диффузные мембраны, такие как Изоспан АМ.

Материал может применяться только для холодной кровли

Конечно, пленку можно использовать в качестве пароизоляции утепленных кровель, однако это нерационально, так как существует более дешевая серия Изоспан b. Последняя не менее эффективно защищает конструкцию от пара.

Еще один минус — это достаточно высокая стоимость, если сравнивать материал с аналогами от других отечественных производителей.

Характеристики

Изоспан d имеет следующие технические характеристики:

Если вы сравните Изоспан серии «d» и «b», то увидите, что характеристики у обоих материалов практически одинаковые, за исключением прочности, которая у рассматриваемого покрытия в 8-10 раз выше, чем у Изоспан b.

Гидроизоляция Изоспан d может применяться для плоской кровли

Область применения

Изоспан серии d применяется в следующих случаях:

• В качестве гидроизоляции плоской кровли, если сверху планируется утеплитель или цементная стяжка;
• В качестве гидроизоляции наклонной неутепленной кровли;
• Для гидроизоляции цокольного перекрытия;
• В качестве временного покрытия стен или кровли (не более 3-4 месяцев). Пленка при этом способна нести даже снеговую нагрузку;

Гидроизоляцию можно использовать для укладки под стяжку

• Для гидроизоляции пола на бетонном основании (под стяжку или лаги).

Стоимость

Для сравнения я привел стоимость Изоспан d, а также цены на аналоги от других производителей:

Технология применения

Гидроизоляция скатной кровли

В качестве примера рассмотрим как укладывать покрытие на скатную кровлю. Данную процедуру можно разбить на два основных этапа:

Этапы гидроизоляции

Инструкция по применению Изоспан d выглядит следующим образом:

Гидроизоляция пола

Инструкция по гидроизоляции бетонных полов выглядит еще проще:

Вывод

Теперь вы знаете, что представляет собой Изоспан Д, и для каких целей можно использовать этот материал. Рекомендую дополнительно посмотреть видео в этой статье. А если какие-либо моменты вам непонятны, пишите комментарии, и я с радостью вам отвечу.

Добавить в избранное Версия для печати

Поделитесь:

Рейтинг статьи:

Статьи по теме

Все материалы по теме

Наноспан, альтернативно сплайсированная изоформа саркоспана, локализуется в саркоплазматическом ретикулуме скелетных мышц и отсутствует при мышечной дистрофии пояса конечностей 2F | Скелетные мышцы

• Исследования
• Открытый доступ
• Опубликовано: 06 июня 2017 г.

• Анджела К. Питер ^1,8 ,
• Гейнор Миллер ^1,9 ,
• Joana Capote ^2,3 ,
• Marino Difranco ^3,4 ,
• Alhondra Solares-Pérez ⁵ ,
• Emily L. Wang ¹ ,
• JIM
• HEIGH ^,
• 9
• JIM
• ^,
• ^,
• ^,
• .
• Рамон М. Корал-Васкес ⁵ ,
• Хулио Вергара ^3,4 и
• …
• Rachelle H. Crosbie-Watson ^1,2,3,7

66666. Скелетная мышца том 7 , номер статьи: 11 (2017) Процитировать эту статью

• 2130 доступов

• 3 Цитаты

• 1 Альтметрический

• Сведения о показателях

Abstract

История вопроса

Саркоспан (SSPN) представляет собой трансмембранный белок, который взаимодействует с саркогликанами (SG) с образованием плотного субкомплекса в комплексе дистрофин-гликопротеин, который охватывает сарколемму и взаимодействует с ламинином во внеклеточном матриксе. Гиперэкспрессия SSPN облегчает течение мышечной дистрофии Дюшенна на мышиных моделях.

Методы

Стандартные подходы к клонированию были использованы для идентификации наноспана, и были созданы и проверены поликлональные антитела, специфичные для наноспана. Биохимическая изоляция мембран скелетных мышц и двухфотонная лазерная сканирующая микроскопия использовались для анализа локализации нанопромежутков в мышцах на нескольких мышиных моделях. Биоптаты мышечной дистрофии Дюшенна анализировали с помощью иммуноблот-анализа белковых лизатов, а также непрямого иммунофлуоресцентного анализа криосрезов мышц.

Результаты

Наноспан представляет собой альтернативно сплайсированную изоформу саркоспана. В то время как SSPN имеет четыре трансмембранных домена и является основным компонентом сарколеммального комплекса дистрофин-гликопротеин, наноспан представляет собой трансмембранный белок типа II, который не связан с комплексом дистрофин-гликопротеин. Мы демонстрируем, что наноспан обогащен фракциями саркоплазматического ретикулума (SR) и не присутствует в Т-трубочках. Фракции SR содержат мембраны из трех различных структурных областей: области, граничащей с Т-трубочками (триадическая SR), области SR поперек Z-линии (ZSR) и продольной области SR поперек М-линии (LSR). Анализ изолированных мышц мышей показывает, что наноспан в основном связан с ZSR и триадным SR и лишь в минимальной степени с LSR. Кроме того, в СР δ-SG-null отсутствует наноспан (Sgcd ^-/- ) скелетная мышца, мышиная модель поясно-конечностной мышечной дистрофии 2F. Анализ биоптатов скелетных мышц пациентов с мышечной дистрофией Дюшенна показывает, что наноспан преимущественно экспрессируется в волокнах типа I (медленных) как в контрольных образцах, так и в образцах Дюшенна. Кроме того, в биоптатах Дюшенна значительно уменьшается нанодиапазон.

Выводы

Альтернативный сплайсинг белков из комплекса SG-SSPN дает δ-SG3, микроспан и наноспан, которые локализуются в ZSR и триадном SR, где они могут играть роль в регуляции уровней кальция в покое, что подтверждается предыдущими исследованиями. (Estrada et al., Biochem Biophys Res Commun 340:865–71, 2006). Таким образом, в результате альтернативного сплайсинга мРНК SSPN образуются три белковые изоформы (SSPN, microspan и nanospan), различающиеся количеством трансмембранных доменов, влияющих на ассоциацию субклеточных мембран в отдельные белковые комплексы.

История вопроса

Интегральные и периферические мембранные белки комплекса дистрофина-гликопротеина, или DGC, функционируют, обеспечивая физическую связь через мышечную мембрану, чтобы соединить внеклеточный матрикс с F-актиновым цитоскелетом [1, 2]. Основные компоненты DGC включают дистрофин, саркогликаны (SGs), саркоспан (SSPN), дистрогликан (α-, β-DG) и синтрофины [3,4,5,6,7]. Субкомплекс SG DGC состоит из четырех однопроходных трансмембранных гликопротеинов, обозначаемых как α-, β-, γ- и δ-SG [8]. SSPN, интегральный мембранный белок массой 25 кДа, структурно гомологичный суперсемейству белков CD20, который также проявляет некоторое сходство с тетраспанинами [1], взаимодействует с SG на сарколемме с образованием плотного субкомплекса (SG-SSPN), который закрепляет α -DG на клеточную поверхность и способствует поддержанию целостности клеток [9]. ]. Аутосомно-рецессивная поясно-мышечная дистрофия конечностей (AR-LGMD) типов 2D, 2E, 2C и 2F вызывается первичными мутациями в генах α-, β-, γ- и δ-SG соответственно. Отсутствие экспрессии любого из SGs приводит к специфической потере всего субкомплекса SG-SSPN, дестабилизации α-DG и повреждению сарколеммы [8,9,10].

В то время как потеря комплексов адгезии мышечных клеток, которые делают сарколемму восприимчивой к сокращению, широко признается в качестве начального повреждения дистрофических мышц, существуют убедительные доказательства дисфункциональной обработки кальция в мышечных волокнах, что способствует прогрессированию заболевания. Электрофизиологические исследования выявили нарушение сопряжения возбуждения и сокращения при дефиците дистрофина (9).0105 mdx ) мышцы, включая снижение высвобождения кальция из саркоплазматического ретикулума (SR) в ответ на активацию напряжения в миофибриллах mdx [11,12,13,14]. Структурные и функциональные дефекты в рецепторе 1 рианодина канала высвобождения кальция SR (RyR1) внесли свой вклад в модель «дырявого» канала. Элегантные исследования, проведенные Марксом и его коллегами [15,16,17], выявили увеличение S-нитрозилирования цистеиновых остатков RyR1 в мышце mdx , что приводит к разрушению макрокомплексов RyR1 (включая истощение кальстабина1), которые регулируют высвобождение кальция из SR. [15,16,17]. Дефектная передача сигналов механотрансдукции, вызванная активными формами кислорода (АФК), способствует mdx кальциевая дисфункция по механизму, который включает усиление притока кальция в сарколемму через механочувствительные кальциевые каналы [18,19,20]. Актуальность функции SR для прогрессирования заболевания при дистрофинопатиях и саркогликанопатиях становится очевидной, поскольку сверхэкспрессия SERCA1 у мышей mdx и δ-SG-null (Sgcd ^-/- ) снижает центральную нуклеацию, фиброз тканей и повреждение мембран [21]. ]. Кроме того, введение SERCA1 реверсировало дефекты обратного захвата кальция в SR и уменьшало общий цитозольный кальций, который характерен для дистрофических мышц [21]. Эти исследования подкрепляются дополнительными сообщениями о том, что введение SERCA2 или доминантно-негативного Orai1 уменьшает дистрофическую патологию за счет улучшения дефектов обработки кальция SR [21, 22].

Используя конфокальную и электронную микроскопию, Ueda и коллеги продемонстрировали, что γ- и δ-SG присутствуют в мембранах SR в дополнение к их локализации с дистрофином в сарколемме, тогда как α- и β-SG ограничены сарколеммой [23] . Это открытие свидетельствует о том, что γ- и δ-SG должны выполнять дополнительные функции в мембранах SR независимо от их роли в DGC на сарколемме. Более того, позднее сообщалось, что альтернативно сплайсированная изоформа δ-SG, называемая δ-SG3, в которой С-конец заменен 10 аминокислотами, также экспрессируется исключительно на мембранах SR скелетных мышц [24]. Основываясь на расположении этого белка и нарушениях гомеостаза кальция через мембраны SR, ранее описанных у животных с дефицитом δ-SG, авторы предполагают, что δ-SG3 может участвовать в регуляции соответствующей локализации и/или поддержании белков. участие в кальциевом гомеостазе в СР.

Ранее мы идентифицировали альтернативно сплайсированную изоформу SSPN, которая не локализована в сарколемме [25]. Матричная РНК (мРНК) SSPN подвергается альтернативному сплайсингу с образованием нового белка меньшего размера, который мы назвали microspan (µSPN) [25], который обогащен как легкой, так и тяжелой фракциями мембраны SR (LSR и HSR соответственно) [26]. . Анализ фракций SR показал, что, хотя все γ-SG, δ-SG, δ-SG3 и µSPN присутствуют в LSR, в HSR, по-видимому, экспрессируются только δ-SG3 и µSPN. Кроме того, оценка экспрессии этих белков в скелетных мышцах Sgcd ^-/- мышей показали, что потеря экспрессии δ-SG приводит к вторичной потере γ-SG и μSPN. Полученные данные повышают вероятность того, что эти белки могут быть связаны в виде комплекса в мембранах SR и что δ-SG (или δ-SG3) может играть роль в стабилизации и/или локализации экспрессии γ-SG и μSPN в SR. [26]. Оценка высвобождения Ca ²⁺ и поглощения LSR и HSR у мышей дикого типа и Sgcd ^-/- показала, что, тогда как высвобождение Ca ²⁺ из везикул HSR у этих мышей не отличается, Ca 9Отток 0014 2+ (в основном через SERCA1) значительно повышен в везикулах LSR от мышей Sgcd ^-/- [26]. Кроме того, авторы показали изменения термостабильности и энтальпии SERCA1 в везикулах LSR от мышей Sgcd ^-/- , предполагая, что отсутствие специфического для LSR комплекса SG-SSPN (γ-SG, δ-SG, δ- SG3 и µSPN) влияет на структуру и функцию SERCA1 [26].

В текущем исследовании мы сообщаем об идентификации третьего белка, полученного в результате альтернативного сплайсинга мРНК SSPN. Мы обозначаем его как «наноспан» или nSPN, поскольку прогнозируемая молекулярная масса (10,5 кДа) меньше, чем у SSPN или μSPN. Мы демонстрируем, что nSPN локализуется в мембранах SR и снижается в контексте дистрофического заболевания.

Методы

Скрининг библиотеки кДНК

Библиотеку комплементарной ДНК (кДНК) скелетных мышц человека (BD Biosciences Clontech) подвергали скринингу с помощью зондов, представляющих экзоны 1 и 3 SSPN, как описано ранее [25]. Клоны, содержащие экзон 1, но не содержащие экзон 3, очищали и подвергали ПЦР-амплификации с использованием праймеров в плечах вектора. Продукты ПЦР клонировали в pCR ^@ 2.1-TOPO ^@ (Invitrogen, Carlsbad, CA) и подвергали прямому секвенированию ДНК (UCLA Sequencing and Genotyping Core Facility). Были идентифицированы клоны, содержащие экзон 1, сплайсированный с новым экзоном, названным экзоном 4. Была идентифицирована открытая рамка считывания, и было предсказано, что она кодирует небольшой белок массой 10,5 кДа, который был назван наноспан (сокращенно nSPN), как показано на рисунке (рис. 1).

Альтернативный сплайсинг SSPN генерирует µSPN и nSPN. a Схематическое представление геномной организации гена SSPN на хромосоме человека 12p11.2. Экзоны изображены как сплошных прямоугольников и имеют цветовую кодировку. Изображены экзон 1 ( красный ), экзон 2 ( желтый ), экзон 3 ( синий ), экзон 4 ( зеленый ) и интроны ( черные линии ). Указан примерный размер каждого интрона (т.п.н.). Также показаны паттерны сплайсинга мРНК, генерирующие SSPN, µSPN и nSPN. b Прогнозируемые топологии мембран для SSPN, µSPN и nSPN показаны на трех отдельных схематических диаграммах. Каждая полипептидная область имеет цветовую кодировку в соответствии с соответствующим экзоном. SSPN имеет четыре трансмембранных домена (от TM1 до TM4), небольшую внеклеточную петлю (SEL) и большую внеклеточную петлю (LEL). µSPN содержит два трансмембранных домена (TM1 и TM2). N- и C-концы µSPN строго предсказаны как внутриклеточные с использованием алгоритмов топологии. nSPN сохраняет первый трансмембранный домен SSPN (TM1) и, как предполагается, имеет внеклеточный С-конец. Указана предполагаемая молекулярная масса каждого белка, родственного SSPN. c Первичная и предполагаемая аминокислотная последовательность nSPN человека представлена ​​однобуквенным кодом. Каждый экзон и его выведенная аминокислотная последовательность имеют следующую цветовую кодировку: экзон 1 ( красный ) и экзон 4 ( зеленый ). Открытая рамка считывания nSPN кодирует полипептид из 99 аминокислот. Предсказанный трансмембранный домен (TM1) имеет номер , подчеркнутый . Область из 12 аминокислот, используемая в качестве антигена для производства поликлональных антител (Кролик 20), подчеркнута двойным подчеркиванием . Стрелки обозначают прямые и обратные праймеры, обобщенные в таблице 1, используемые в анализе ОТ-ПЦР (дополнительный файл 1: рисунок S1). Звездочка представляет собой предполагаемый стоп-кодон

Изображение в полный размер

В качестве дополнительного подхода кДНК nSPN амплифицировали с помощью полимеразной цепной реакции с обратной транскриптазой (ОТ-ПЦР) из 2,5 мкг кДНК скелетных мышц человека Marathon-Ready™ ( BD Biosciences Clontech, Сан-Хосе, Калифорния) с использованием прямых праймеров в экзоне 1 (SSPNATGF: 5′-ATGGGCAAGAACGAGCAG-3′; GenBank AF016028; человеческий SSPN) и обратных праймеров в 3′-нетранслируемой области (UTR) µSPN, расположенной в 26 нуклеотидах ( nt) ниже стоп-кодона (Ex3vReverse: 5′-TCCATTCCAAATGGCTTGAT-3′). В таблице 1 представлен полный список праймеров для ПЦР, использованных в исследовании. Второй раунд ПЦР проводили, как описано выше, с использованием прямого праймера экзона 1 (SSPNATGF) и второго, вложенного обратного праймера, расположенного между границей экзона 4 с 2 нуклеотидами в экзоне 1 (Ex1/4R: 5′-TCAGAAGTCATGACAATGGATAA-3′ ; GenBank EU433933; µSPN человека). ПЦР проводили с помощью градиентного термоциклера Eppendorf (Westbury, NY) при следующих условиях: 35 циклов денатурации при 94°C в течение 15 с, отжиг при 52°C в течение 90 с и удлинение при 72°C в течение 2 мин с последующим на 72°С в течение 10 мин. Продукты ПЦР подвергали электрофорезу в агарозном геле и экстракции из геля с помощью системы гель-экстракции QIAEX II (Qiagen, Валенсия, Калифорния). Были выделены два продукта ПЦР, клонированы в pCR2.1-TOPO ^@ и подвергнуты прямому секвенированию ДНК (дополнительный файл 1: рисунок S1). Один из фрагментов (387 пар оснований (п.н.)) кодировал µSPN (NCBI EU433933), который служил положительным контролем для ПЦР. Второй фрагмент меньшего размера (300 п.н.) представляет собой прямой сплайсинг экзона 1 с экзоном 4 для создания полной открытой рамки считывания (ORF) с инициатором метионином и стоп-кодоном (рис. 1b). Предполагается, что ORF кодирует nSPN (рис. 1c). Регистрационный номер NCBI/GenBank для последовательности nSPN человека: DQ897666.

Полноразмерная таблица

Анализ множественных тканей ОТ-ПЦР

Тотальную РНК (1 мкг) из тканей человека использовали для синтеза кДНК с использованием системы обратной транскрипции Promega (Promega, Мэдисон, Висконсин). ОТ-ПЦР выполняли с использованием прямого праймера в экзоне 1 (SSPN1118F: 5′-CTGCTAGTCAGGGACACTC-3′; GenBank AF016028; SSPN человека) и обратного праймера в 3′-UTR nSPN, который находится на 7 нуклеотидов ниже стоп-кодона ( Ex4R: 5′-TTGATTCTGAGAACATTCTCTTTC-3′; GenBank EU433933; человеческий µSPN). Пожалуйста, обратитесь к таблице 1 для получения дополнительной информации об олигонуклеотидах. Условия ОТ-ПЦР выполняли, как описано ранее [25, 27].

Нозерн-блоттинг

Нозерн-блоты множественных тканей взрослого человека (Clontech Inc.), содержащие 2 мкг поли-A ⁺ РНК на дорожку, исследовали с помощью олигонуклеотидов, охватывающих экзон 1 и экзон 4, как описано ранее [1] и в таблице 1.

Получение антител к nSPN

Поликлональные антитела к nSPN получали путем инъекции 500 мкг синтетического пептида (пептид 20 CAARRFWAGIIIHCHDF, New England Peptide, Gardner, MA), связанного с KLH, новозеландскому белому кролику (Rabbit 20, Charles River). , Уилмингтон, Массачусетс), используя ранее описанные методы [1, 25]. Последовательность пептида охватывает соединение между экзонами 1 и 4 (рис. 1a, двойное подчеркивание), что является уникальным для nSPN. Антитела были аффинно очищены из кроличьей сыворотки с использованием пептидов nSPN, связанных с BSA, и обозначаются как R20. Антитела к N-концевой области SSPN (аминокислоты SSPN 1–26; инвентарный номер GenBank U02487, Rabbit 3) были созданы ранее [25]. Эти антитела распознают SSPN, μSPN и nSPN, поскольку все эти изоформы содержат N-концевую область, кодируемую экзоном 1 (таблица 2).

Полноразмерная таблица

Модели на животных

mdx (C57-BL/10ScSn- Dmd ^mdx /J), мыши дикого типа (C57-BL/6J) и δ-SG-null (Sgcd ^-/- , B6.129-Sgcd ^tm1Mcn /J) были приобретены у компании Jackson. Лаборатория (Бар-Харбор, Мэн). Мыши с дефицитом SSPN [28] были подарком Кевина П. Кэмпбелла, доктора философии. (Медицинский колледж Университета Айовы, Медицинский институт Говарда Хьюза, Айова-Сити, Айова) и доступны в лаборатории Джексона. Генотипирование подтверждали с помощью установленных ПЦР, как описано ранее [29].]. Мышей содержали в виварии Terasaki Life Sciences Vivarium, и все процедуры проводились в соответствии с рекомендациями, установленными Комитетом по уходу и использованию животных Калифорнийского университета в Лос-Анджелесе (A3196-01).

Белковые препараты контроля и DMD

Лизаты тотальных скелетных мышц готовили в модифицированном буфере для лизиса RIPA (1% Nonidet P-40, 0,5% дезоксихолат натрия, 0,1% SDS, 1 мМ ЭДТА, 5 мМ N -этилмалеимид, 50 мМ фторида натрия, 2 мМ β-глицерофосфата, 1 мМ ортованадата натрия, 100 нМ окадаиновой кислоты, 5 нМ микроцистина LR и 20 мМ трис-HCl; pH 7,6). Перед гомогенизацией в буфер для лизиса добавляли ингибиторы протеазы (0,6 мкг/мл пепстатина А, 0,5 мкг/мл апротинина, 0,5 мкг/мл лейпептина, 0,75 мМ бензамидина и 0,1 мМ PMSF). Образцы вращали при 4 °C в течение 1 ч и осветляли центрифугированием при 15 000 ×  г на 15 мин. Перед анализом с помощью электрофореза в SDS-полиакриламидном геле концентрации белка анализировали с использованием DC Protein Assay® (Bio-Rad, Hercules, CA). Осветленные лизаты (60 мкг) загружали в 15% SDS-полиакриламидные гели и переносили на нитроцеллюлозу (Millipore Corp., Billerica, MA). Затем нитроцеллюлозные мембраны инкубировали с аффинно очищенными поликлональными антителами к nSPN (Кролик 20, кровотечение 2; 1:100) и SSPN (Кролик 15, кровотечение 4; 1:100). Использовали вторичные антитела против IgG кролика, конъюгированные с пероксидазой хрена (Amersham Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ), в разведении 1:3000. Coomassie Plus Protein Assay Reagent (Pierce, Rockford, IL, USA) использовали для подтверждения равной загрузки лизатов контрольной ткани и мышечной дистрофии Дюшенна (МДД).

Иммунофлуоресцентный анализ

Поперечные (8 мкм) срезы контрольной ткани и ткани МДД готовили с использованием криостата Leica CM3050 S (Leica Microsystems, Bannockburn, IL). Срезы блокировали 3% BSA в PBS на 1 ч при комнатной температуре (КТ). Для подтверждения генотипа образцов человека использовали С-концевые антитела к дистрофину (VP-D505, Vector Laboratories Inc.). Дистрофин был обнаружен в сарколемме в контрольной ткани, но отсутствовал в биоптатах МДД. Для экспериментов по совместной локализации срезы инкубировали с антителами к nSPN (Rabbit 20, кровотечение 4; 1:10) и тяжелой цепью медленного миозина (VP-M667, Vector Laboratories Inc.; 1:50) или тяжелой цепью быстрого миозина (VP-M667, Vector Laboratories Inc. ; 1:50). -M665, Vector Laboratories Inc.; 1:25), при 4 °C в течение 12 ч. После промывания срезы инкубировали со вторичными антителами против FITC против кролика (Vector Laboratories Inc.) и против Cy3 против мыши (Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA), разведенных 1:500, в течение 1 часа при комнатной температуре. Срезы промывали PBS и монтировали с использованием VECTASHIELD (Vector Laboratories Inc.). Срезы инкубировали только с вторичными антителами в качестве отрицательного контроля (данные не показаны). Все срезы фотографировали в одинаковых условиях с использованием флуоресцентного микроскопа Axioplan 2 и программного обеспечения AxioVision 3.0 (Carl Zeiss Inc, Thornwood, NY).

Выделение мембран поперечных канальцев и саркоплазматического ретикулума

Поперечные канальцы (Т-трубочки) и мембраны SR были получены из полных скелетных мышц, вырезанных из 4-месячных мышей дикого типа (WT) и Sgcd ^-/- . Выделение проводили дифференциальным центрифугированием и прерывистым градиентом сахарозы, как описано ранее [30]. Мембранную изоляцию проводили в отсутствие какого-либо восстанавливающего агента в буферной среде. Микросомальную фракцию помещали в первый градиент сахарозы 25, 27,5 и 35% (масса/объем). Интерфейс 25/27,5% показал максимальный сигнал для DHPR, определенный с помощью иммуноблоттинга, что указывает на то, что микросомальная фракция содержит мембраны Т-трубочек (не показаны). Было проведено дополнительное центрифугирование в прерывистом градиенте сахарозы 25/45% для удаления Ca ²⁺ -нагруженные оксалатом везикулы [31]. Тяжелый SR и легкий SR выделяли из полосы 35%, полученной из первого прерывистого градиента сахарозы, по существу, как описано ранее [32]. Легкий СР выявляли по максимальной АТФазной активности, стимулированной Са ²⁺ , а РГЧ выявляли по максимальной иммунореактивности с антителом анти-RyR. Для иммуноблоттинга использовали антитела против nSPN (R20, B2). Мембранные препараты проверяли с помощью иммуноблоттинга с антителами к DHPR, RyR, SERCA1 и триадину (данные не представлены), как описано ранее [30, 31]. Концентрацию белка определяли с использованием реагента для анализа белка Coomassie Plus Protein Assay Reagent (Pierce, Rockford, IL, USA) с BSA в качестве стандарта.

Иммуногистохимия мышц мышей

Короткий сгибатель пальцев и межкостные мышцы вырезали у мышей C57-BL/6J и SSPN-null. Мышцы слегка растягивали и помещали в чашку Петри с дном Сильгарда, содержащую раствор Тирода (145 мМ NaCl, 5 мМ KCl, 2 мМ CaCl ₂ , 1 мМ MgCl ₂ , 10 мМ Na-MOPS и 10 мМ декстрозы). ; рН 7,2). Окружающая соединительная ткань была механически удалена под препаровальным микроскопом. Затем мышцы фиксировали в 2% параформальдегиде (по Тироду) в течение 1,5 ч при комнатной температуре. После трех промывок PBS (каждая по 10 мин) мышцы пермеабилизировали (0,2% Triton X-100, 1% FBS в PBS) в течение 1,5 ч при комнатной температуре, а затем трижды промывали 1% раствором FBS в PBS (10 мин). каждый). При использовании первичных антител, выработанных у мышей, на этом этапе к протоколу добавлялся дополнительный этап блокирования с использованием базового набора «Мышь на мышах» (M. O.M.™) (Vector Laboratories Inc.) в соответствии с инструкциями производителя. Затем мышцы инкубировали с первичным антителом (разведенным либо в разбавителе M.O.M., либо в 1% FBS в PBS) в течение 6 часов при комнатной температуре или в течение ночи при 4 °C. После трех промывок (1% FBS в PBS, по 10 минут каждая) мышцы позже инкубировали в соответствующем вторичном антителе, помеченном либо Alexa 488, либо Texas Red (разбавленным 1:50 либо в разбавителе MOM, либо 1% FBS в PBS) для 6 ч при комнатной температуре или в течение ночи при 4 °C. Наконец, образцы трижды промывали PBS (каждый раз по 10 минут), а затем выдерживали в PBS до получения изображения. При использовании двух разных антител использовали последовательное, а не одновременное мечение.

Двухфотонная лазерная сканирующая микроскопия

Меченые антителами мышцы прикрепляли к чашкам Петри с дном Sylgard, содержащим PBS, и помещали на предметный столик вертикального микроскопа (BX51WI, Olympus, Япония), оснащенного перестраиваемым лазером Chameleon Ti/Sapphire. (Coherent) и сканирующей головкой Radiance 2000 (Bio-Rad, Великобритания). Изображения были получены с водоиммерсионным объективом ×20, 0,95 NA (Olympus XLUMPLANFL). Мышцы, помеченные только Alexa 488 или Alexa 488 и Texas Red, возбуждались лазером с длиной волны 840 нм. Изображения были одновременно получены с использованием следующих комбинаций фильтров (полосовой/дихроичный/полосовой, в нм): генерация второй гармоники (SHG) и излучение Alexa 488 (410-490//495//500-530), Alexa 488 и излучение Texas Red (500-530//550//620-660), а также SHG и излучение Texas Red (402-446//495//615-645) . Изображения анализировали с использованием коммерческого (LaserSharp 2000, Bio-Rad, UK) и/или общедоступного пакета программного обеспечения для анализа изображений (ImageJ).

Результаты

Молекулярное клонирование наноспана, сплайс-варианта саркоспана

Ген SSPN расположен на хромосоме 12p11.2 человека и состоит из четырех экзонов, разделенных крупными интронами [1, 33]. Полноразмерный белок SSPN кодируется тремя небольшими экзонами (экзоны 1, 2 и 3), определяющими белок массой 25 кДа с четырьмя трансмембранными доменами (TM1–4 от N- до С-конца), коротким внеклеточная петля (SEL) и большая внеклеточная петля (LEL; рис. 1a, b) [1]. Предполагается, что N- и С-концы являются внутриклеточными. Мы показали, что мРНК SSPN подвергается альтернативному сплайсингу с образованием microspan (µSPN) [25]. Экзоны 1, 2 и 4 кодируют µSPN, белок массой 14 кДа, который, как предполагается, содержит внутриклеточный N-конец, а также трансмембранные домены 1 и 2 (рис. 1b; аминокислоты, кодируемые экзонами 1 и 2, отмечены красным и желтый соответственно). Экзон 4 вводит шесть новых аминокислот, которые, как предполагается, являются внутриклеточными (рис. 1b; аминокислоты, кодируемые экзоном 4, выделены зеленым цветом). µSPN отсутствует на сарколемме, но локализован в мембранах SR [25].

Присутствие множественных транскриптов, связанных с SSPN, которые кодируют альтернативно сплайсированные изоформы SSPN, подтверждается анализом Нозерн-блоттинга, в котором многие транскрипты SSPN присутствуют в скелетных и сердечных мышцах [1, 33]. Все транскрипты гибридизировались с зондами экзона 1 SSPN , что свидетельствует о том, что экзон 1 является общим для всех изоформ SSPN, в то время как зонды экзона 3 гибридизуются только с одной полосой на нозерн-блоте [1, 33]. В нашей первоначальной идентификации μSPN мы провели скрининг библиотеки кДНК скелетных мышц человека отдельно с зондами экзона 1 и экзона 3. Мы идентифицировали множество клонов, которые гибридизуются с экзоном 1, но не с экзоном 3, что позволяет предположить наличие других транскриптов, связанных с SSPN. Как сообщалось ранее [25], четыре отдельных клона были выделены со вставками размером приблизительно 4 т.п.н., и один из этих клонов содержал вариант сплайсинга SSPN, который мы назвали µSPN. В текущем исследовании мы сообщаем о секвенировании ДНК второго клона, выявляющем наличие ORF, окруженной короткой 5′-UTR и длинной 3′-UTR. ORF состояла из экзона 1, сплайсированного с экзоном 4 (GenBank DQ897666; Рисунок 1).

В качестве дополнительного подхода амплификацию ОТ-ПЦР проводили с использованием кДНК скелетных мышц человека в качестве матрицы. Прямой праймер был разработан для гибридизации с экзоном 1, который является общим как для SSPN, так и для µSPN (рис. 1c). Однако последовательность обратного праймера гибридизовалась с экзоном 4, уникальным для µSPN (рис. 1c). Предполагается, что анализы ПЦР, выполненные с праймерами в экзонах 1 и 4, амплифицируют µSPN, а также любые другие кДНК, гибридизующиеся с праймерами в экзонах 1 и 4. Только два продукта ПЦР были выделены и охарактеризованы прямым секвенированием ДНК (дополнительный файл 1: рисунок S1). Один из фрагментов (387 п.н.) кодировал µSPN (NCBI EU433933), который служил положительным контролем для ПЦР. Второй фрагмент меньшего размера (300 п.н.) представляет собой прямой сплайсинг экзона 1 с экзоном 4 для создания полной ORF с инициатором метионином и стоп-кодоном (рис. 1b). Предполагается, что ORF кодирует полипептид из 99 аминокислот с расчетной молекулярной массой 10,5 кДа (рис. 1c; NCBI DQ897666). Мы обозначаем эту изоформу как «наноспан» (nSPN) в соответствии с предшествующей номенклатурой, отражающей предсказанную молекулярную массу изоформ SSPN (рис. 1).

SSPN проявляет гомологию с суперсемействами CD20 и тетраспанина. Алгоритмы топологии предсказывают, что N- и C-концы SSPN являются внутриклеточными, как показано на рис. 1b [1]. µSPN кодируется путем сплайсинга экзонов 1, 2 и 4 с образованием белка только с двумя трансмембранными доменами (TM1-2), которые, вероятно, образуют структуру петли-шпильки в плазматической мембране [25]. Первичная аминокислотная последовательность, полученная из кДНК nSPN человека, предсказывает белок с одним трансмембранным доменом и топологией, отличной от SSPN или μSPN (рис. 1c). Экзон 1, общий для всех трех вариантов сплайсинга SSPN, кодирует внутриклеточный N-конец и один трансмембранный домен (рис. 1a–c; аминокислоты, кодируемые экзоном 1, выделены красным). В nSPN экзон 1 непосредственно сплайсирован с экзоном 4, который кодирует только шесть аминокислот, за которыми следует стоп-кодон (закодирован зеленым). Хотя nSPN и µSPN содержат экзон 4, предполагается, что их С-концевые области лежат на разных сторонах мембраны. nSPN не имеет гомологии ни с какими другими известными белками, обнаруженными в базах данных GenBank, TIGR или dbEST, и не имеет консервативных сайтов для гликозилирования. TM3, LEL и TM4 уникальны для SSPN, и предыдущая работа нашей группы предполагает, что основной домен(ы) связывания SG находится в пределах LEL [34]. Это согласуется с предыдущими данными о том, что SSPN, но не µSPN, является неотъемлемым компонентом DGC [1, 33, 35].

мРНК Nanospan экспрессируется в скелетных мышцах человека

Для изучения распределения мРНК nSPN был проведен Нозерн-блот-анализ широкого спектра тканей человека. Нейлоновые мембраны, содержащие поли-A ⁺ РНК, исследовали с помощью олигонуклеотидов, предназначенных для гибридизации с nSPN (таблица 1), как показано на рис. 1a. Мы наблюдали обильный транскрипт длиной 1,5 т.п.н. в сердце, печени и скелетных мышцах (рис. 2). Более низкие уровни транскрипта nSPN длиной 1,5 т.п.н. были обнаружены в нескольких немышечных тканях, включая головной мозг, плаценту, почки и поджелудочную железу. ОТ-ПЦР-анализ кДНК, выделенной из различных тканей человека, демонстрирует высокую экспрессию nSPN в поперечно-полосатых мышцах (дополнительный файл 1: рисунок S1), что подтверждает данные Нозерн-блоттинга.

Экспрессия транскрипта мРНК nSPN в тканях человека. Нозерн-блоты, содержащие 2 мг поли-A ⁺ РНК из указанных тканей человека, гибридизовали с nSPN-специфическим олигонуклеотидом. Стрелка указывает на транскрипт мРНК nSPN размером 1,5 т.п.н. Маркеры молекулярного размера указаны слева (kb)

Изображение в полный размер

Обнаружение белка наноспан в скелетных мышцах

Для того чтобы оценить экспрессию nSPN на уровне белка, мы получили поликлональные антитела против nSPN путем иммунизации кроликов. с синтетическим пептидом из 12 аминокислот. Пептидная последовательность была выбрана так, чтобы охватывать соединение между экзоном 1 и экзоном 4, которое включает шесть аминокислот, кодируемых каждым экзоном (рис. 1c, двойное подчеркивание). Специфичность антител к nSPN определяли с помощью нескольких анализов. Во-первых, мы демонстрируем, что аффинно-очищенные антитела R20 распознавали только BSA, связанный с пептидом nSPN 20, и не давали перекрестной реакции с BSA, конъюгированным с неспецифическим пептидом, или только с BSA (рис. 3a). Во-вторых, специфичность R20 исследовали с помощью экспериментов по конкуренции пептидов, как описано ранее [1, 25]. Антитела R20 распознавали nSPN (~11 кДа) в микросомах, полученных из скелетных мышц кролика и мыши (рис. 3b). Мы обнаружили, что связывание R20 с nSPN ингибировалось в присутствии nSPN-пептида 20 (рис. 3c), но не в присутствии неспецифического контрольного пептида (рис. 3d). Наконец, мы демонстрируем, что антитела nSPN не реагируют перекрестно с µSPN, исследуя белковые лизаты из скелетных мышц дикого типа (нетрансгенных) и µSPN-трансгенных (Tg). μSPN-специфические антитела (Кролик 12 [22]) связываются с белком μSPN-Tg (рис. 3e). Однако антитела к nSPN не реагируют перекрестно с μSPN (рис.  3e). Чтобы продемонстрировать, что антитела к nSPN не реагируют перекрестно с SSPN, мы исследовали белковые лизаты из скелетных мышц дикого типа (нетрансгенных) и SSPN-Tg. SSPN-специфические антитела (Кролик 15 [21]) связываются с белком SSPN-Tg (рис. 3f). Однако антитела к nSPN не реагируют перекрестно с SSPN (рис. 3f). Мы использовали трансгенные модели сверхэкспрессии для этих экспериментов из-за обилия μSPN и SSPN, которые поддаются надежному обнаружению белка.

Экспрессия белка nSPN в скелетных мышцах из различных источников. Иммуноблоты, содержащие только BSA, BSA, связанный с nSPN (BSA-nSPN), и BSA, связанный со специфичным для nSPN пептидом 20 (BSA-nSPN) ( a ). Антитела R20 распознавали полосу белка ~ 11 кДа на иммуноблотах тотальных микросом, полученных из скелетных мышц мыши и кролика ( b – d ). Связывание антител R20 (R20 Ab) с nSPN ингибировалось пептидами nSPN (c ), но не неспецифическими контрольными пептидами ( д ). Нитроцеллюлозные мембраны белковых лизатов скелетных мышц дикого типа (нетрансгенных) и µSPN-трансгенных (Tg) исследовали с помощью µSPN-специфических антител (R12), которые, как и ожидалось, демонстрируют перекрестную реактивность с µSPN-трансгенным белком ( e ). Однако антитела к nSPN не реагируют перекрестно с μSPN ( и ). Лизаты общего белка из скелетных мышц дикого типа (нетрансгенных) и SSPN-Tg исследовали с помощью SSPN-специфических антител (R15), которые перекрестно реагируют с SSPN, как и ожидалось (9).0151 ф ). Однако антитела к nSPN (R20) не реагируют перекрестно с SSPN ( и ). В таблице 2 приведены антитела, использованные в исследовании. Маркеры молекулярной массы (кДа) представлены на слева

Изображение в полный размер

Анализ мембранных фракций показывает, что nSPN обогащен SR и утрачен нулевыми δ-SG

Аффинно-очищенные антитела использовали для исследования экспрессии nSPN в препаратах мембран скелетных мышц. В частности, мембраны Т-трубочек, легких SR и тяжелых SR из скелетных мышц мышей дикого типа выделяли ультрацентрифугированием в градиенте сахарозы, как описано ранее [26]. Мембраны Т-трубочек представляют собой инвагинации сарколеммы, содержащие большое количество кальциевых каналов L-типа (DHPR). Мембраны SR биохимически разделены на два функциональных домена: продольный участок (легкий SR) с обогащением SERCA1 и триадный (тяжелый) участок (тяжелый SR), состоящий из терминальных цистерн, которые примыкают к каждой Т-трубочке и содержат такие белки, как RyR. , триадин и кальсеквестрин [36]. Иммуноблот-анализ этих фракций показывает, что nSPN отсутствует в препаратах мембран Т-канальцев, но очень распространен в тяжелых мембранах SR, в то время как низкие уровни nSPN обнаруживаются в легких SR (рис. 4a–c). В качестве контроля показаны DHPR, RyR и SERCA.

Анализ nSPN в изолированных Т-трубочках и мембранах саркоплазматического ретикулума. Мембраны саркоплазматического ретикулума Т-трубочек ( SR ) получали из скелетных мышц контрольных мышей дикого типа ( WT ) и δ-SG-null ( Sgcd ). Анализируемые образцы включают Т-трубочки ( a ), легкий SR ( b ) и тяжелый SR ( c ). Иммуноблотинг DHPR, SERCA1 и RyR в различных фракциях мышечных микросом после центрифугирования в градиенте сахарозы для разделения фракций Т-трубочек и SR. Предыдущие исследования показали, что γ-SG, δ-SG, δ-SG3 и µSPN присутствуют в светлом СР контрольных мышей, но отсутствуют в светлом СР δ-SG-нулевых мышей [26]. Кроме того, наш предыдущий анализ с использованием идентичных препаратов показал, что δ-SG3 и μSPN обогащены тяжелым SR мышц дикого типа, но потеряны в тяжелом SR мышей с нулевым δ-SG. Маркеры молекулярной массы (кДа) представлены на оставил

Увеличенное изображение

Хорошо известно, что SSPN взаимодействует с SGs на сарколемме [9, 34, 37] и что µSPN взаимодействует с вариациями SGs в SR [25, 26]. В этих экспериментах как SSPN, так и µSPN теряются у нескольких моделей мышей с дефицитом SG [38,39,40]. Недавно мы продемонстрировали, что потеря SSPN в скелетных и сердечных мышцах без SSPN значительно снижает количество SG, что приводит к снижению силы [41, 42]. Чтобы определить, влияет ли на nSPN потеря SG, мы проанализировали очищенные фракции Т-трубочек, легких SR и тяжелых SR из скелетных мышц Sgcd 9.0014 -/- мышей. Потеря δ-SG приводит к полному отсутствию других SG [43], и мы не обнаружили примеси SG в препаратах (данные не представлены). Предыдущие исследования показали, что γ-SG, δ-SG, δ-SG3 и µSPN присутствуют в светлом СР контрольных мышей, но отсутствуют в светлом СР мышей Sgcd ^-/- [26]. Кроме того, наш предыдущий анализ с использованием идентичных препаратов показал, что δ-SG3 и μSPN обогащены тяжелым SR мышц дикого типа, но потеряны в тяжелых SR Sgcd 9.0014 -/- мышей. Мы обнаружили, что nSPN был уменьшен или отсутствовал в тяжелой SR и легкой SR фракциях в образцах Sgcd ^-/- соответственно (рис. 4a-c). Эти данные предполагают, что локализация nSPN в SR может зависеть от δ-SG, где он может образовывать субкомплекс с другими SG и μSPN. Также возможна потеря nSPN как вторичное следствие болезненного процесса, и потребуются дополнительные эксперименты, чтобы различить эти возможности.

Субклеточная локализация наноспана

Для более точной локализации nSPN в SR мы использовали двухфотонную лазерную сканирующую микроскопию (TPLSM) для визуализации короткого сгибателя пальцев дикого типа и межкостных мышц, помеченных антителами к nSPN и визуализированных методом непрямой иммунофлуоресценции. Три области мембран SR были определены на основании данных электронной микроскопии [44,45,46]: триадная область, примыкающая к Т-трубочкам (триадная SR), область SR поперек Z-линии (ZSR; [45]) , и участок SR поперек М-линии (LSR; [45]). Обратите внимание, что и ZSR, и LSR представлены в легких фракциях SR, тогда как триадный SR представлен в тяжелых фракциях SR в биохимически выделенных мембранах из скелетных мышц. Точное положение nSPN по отношению к структурам саркомера определяли на основе его относительного распределения по двум ориентирам саркомера: (i) A-полоса с центром на M-линиях, на которую указывает флуоресценция, генерируемая SHG [47], и (ii) Z-линии, обозначенные мечением антителами, специфичными к α-актинину. Данные на рис. 5 показывают расположение nSPN в растянутых волокнах относительно интенсивности флуоресценции от антител к α-актинину и сигнала флуоресценции SHG.

Локализация Nanospan соответствует триадной локализации в слегка растянутых скелетных мышечных волокнах. TPLSM-исследование локализации nSPN в растянутых волокнах скелетных мышц FDB мышей дикого типа (C57-BL/6J). a , b Изображения TPLSM мышцы FDB, одновременно меченной антителами nSPN (Alexa 488) и α-актинина (Texas Red) соответственно. c Наложение изображений на a и b. д , д Одновременные TPLSM-изображения иммунолокализации nSPN и SHG, полученные из мышцы FDB, меченной антителом против nSPN (Alexa 488), соответственно. f Наложение изображений на d и e. g Наложение профилей флуоресценции волокон Alexa 488 (nSPN, , зеленый след ) и Texas Red (α-актинин, , красный след ), показанных на a – c . ч Наложение излучения Alexa 488 (nSPN, зеленая трасса ) и SHG ( синяя трасса ) профили волокон, показанные в d – f (профили взяты из областей, обозначенных ячейками ). Схематические диаграммы внизу g и h показывают соответствие профилей интенсивности основным саркомерным признакам. Саркомерная длина волокон, представленных на этом рисунке, составляет ~ 3 мкм. Масштабная линейка , 10 мкм

Полноразмерное изображение

Как показано на изображениях TPLSM и выделено в профилях интенсивности на рис. 5, nSPN распределяется чередующимися полосами в слегка растянутых волокнах (~ 3 мкм) от мышей WT. Одна полоса относительно толще и ярче, демонстрируя два пика, а чередующаяся полоса тоньше и тусклее, демонстрируя один пик. Как и ожидалось, α-актинин (красный) визуализируется в виде тонких четких поперечных полос (рис. 5b). Наложенное изображение на рис. 5c и профили на рис. 5g демонстрируют, что два пика широкой полосы nSPN сосредоточены на полосе α-актинина (т. е. Z-линия, также дополнительный файл 2: рисунок S2 A– C и G), в то время как полоса с одним пиком располагается посередине между двумя последовательными полосами α-актинина. Аналогичный результат был получен в другой мышце, в которой локализация nSPN (рис. 5г) сравнивается с максимумами изображений ГВГ (рис. 5д). В этом случае как наложенное изображение (рис. 5f), так и профиль интенсивности (рис. 5h) демонстрируют минимальную экспрессию nSPN на пике SHG (т. е. M-линии) и что полоса с двойным пиком расположена посередине между двумя последовательными максимумами ГВГ (т. е. Z-линия). Схематические изображения саркомера на рис. 5g, h иллюстрируют положение nSPN по отношению к признакам сокращения. Изображения TPLSM от мышц WT, которые немного более растянуты (~ 3,7 мкм), показали аналогичное распределение nSPN, за исключением того факта, что более тонкая и слабая полоса, которая локализуется совместно с максимумами SHG, теряется на этих изображениях (дополнительный файл 2: рисунок S2). ). Этот последний результат указывает на то, что сигнал nSPN с центром в М-линии становится ниже уровня обнаружения в более растянутых мышечных волокнах.

Паттерны флуоресценции, наблюдаемые в мышечных волокнах с мечением nSPN, напоминают таковые, наблюдаемые с другими трансмембранными белками SR, такими как SERCA и IP3R (рис. 6a–c и рис. 6d–f соответственно). Ранее с помощью иммуногистохимии было показано, что SERCA и IP3R экспрессируются как в SR с центром в Z-линии (ZSR), так и в SR с центром в M-линии (LSR) [48]. С другой стороны, иммунолокализация белков, экспрессируемых только в триадных соединениях, таких как αDHPR и RyR1, всегда демонстрирует двойную полосу, граничащую с Z-линией (рис. 6g-i и рис. 6j-l, соответственно). На этих изображениях обратите внимание на более короткое расстояние по Z-линии, чем по М-линии. В совокупности результаты биохимического выделения мембран скелетных мышц и TPLSM демонстрируют, что nSPN экспрессируется в SR. Кроме того, TPLSM показывает, что nSPN по-разному экспрессируется в мембране SR, более сильно экспрессируется в SR с центром на Z-линии (как в ZSR, так и в триадном SR) и менее сильно экспрессируется в SR с центром в M-линии. более тонкие и слабые полосы на иммунофлуоресцентных изображениях).

Иммунолокализация мышечных белков с помощью двухфотонной лазерной сканирующей микроскопии. Двухфотонную лазерную сканирующую микроскопию (TPLSM) использовали для изучения локализации экспрессии DHPR, RYR-1, SERCA и IP3R в волокнах скелетных мышц мышей дикого типа (C57-BL/6J). b , e , h , k TPLSM изображения сигналов ГВГ, полученные одновременно с флуоресцентным сигналом от волокон, меченных антителами против SERCA ( a , Техасский красный), IP3R ( d , Техасский красный), DHPR ( g , Техасский красный) и RyR-1 ( j , Техасский красный). c , f , i , l Наложение изображений флуоресценции Texas Red и сигналов ГВГ, полученных от различных мышц. m Наложение профилей флуоресценции Texas Red и SHG волокна, показанного на j – l , и относительная локализация экспрессии RyR-1 в саркомере. n Наложение профилей флуоресценции Texas Red и SHG волокна, показанного в d – f , и относительная локализация экспрессии IP3R в саркомере. Масштабная линейка , 10 мкм

Изображение в полный размер

Затем мы рассмотрели вопрос о том, можно ли обнаружить nSPN в волокнах от SSPN-нулевых мышей, которые были получены путем направленного нокаута экзона 2, интрона 2 и части экзона 3 [28]. В экспериментах по совместной локализации мы обнаружили, что nSPN экспрессируется у мышей без SSPN и что картина распределения nSPN аналогична картине, которую мы задокументировали в мышцах дикого типа при одинаковой длине саркомера (сравните рис. 7a–c с рис. . 7г–е). Более того, когда мы сравнили подробные картины окрашивания мышечных волокон из мышц дикого типа и мышц без SSPN, меченных антителами SSPN, мы смогли различить экспрессию клеточной поверхности и экспрессию внутриклеточной мембраны SR. Обратите внимание, что антитела SSPN были получены к пептиду, расположенному в экзоне 1, который является общим для всех трех изоформ SSPN. Экзон 2 и часть экзона 3 были намечены для делеции у мышей с дефицитом SSPN [28], что, по прогнозам, нарушает экспрессию SSPN и µSPN, но не экспрессию nSPN. SSPN не был обнаружен в сарколемме волокон с дефицитом SSPN (рис. 7h), как ожидалось и показано ранее [28]. Иммуноблот-анализ белковых лизатов с использованием nSPN-специфических антител выявил повышенное количество nSPN в мышцах с дефицитом SSPN (дополнительный файл 3: рисунок S3). Это повышает вероятность того, что nSPN может компенсировать SSPN в DGC мышцы с дефицитом SSPN. Чтобы исследовать эту возможность, мы очистили DGC от мышц с дефицитом SSPN на том основании, что взаимодействие с DGC требуется для компенсации SSPN. Однако nSPN не очищался совместно с комплексом DGC ни в мышцах дикого типа, ни в мышцах с дефицитом SSPN (дополнительный файл 3: рисунок S3). Эти результаты показывают, что общее содержание белка nSPN увеличено и гетерогенно локализовано в сарколемме в контексте дефицита SSPN.

Рис. 7

Полноразмерный SSPN экспрессируется только в поверхностной мембране, и потеря SSPN не влияет на локализацию nSPN. a – c Одновременные TPLSM-изображения иммунолокализации SSPN, µSPN, nSPN ( a ) и SHG ( b ), полученные из мышцы FDB, выделенной от мышей дикого типа и помеченной аффинно-очищенным кроликом 3 ( R3) поликлональные антитела, распознающие N-концевую область, общую для всех трех изоформ SSPN (Alexa 488). c Наложение изображений на a и b . d – f Одновременные TPLSM-изображения иммунолокализации nSPN ( d ) и SHG ( e ), полученные из FDB мышцы, выделенной от SSPN-нулевых мышей и меченных поликлональными антителами Rabbit 3 (R3) (Alexa 488 ). Обратите внимание, что экзон 2 и часть экзона 3 были намечены для делеции в нулевых SSPN [28], что нарушает экспрессию SSPN и µSPN, но не nSPN. f Наложение изображений на д и е . g Увеличенный вид области, ограниченной белым прямоугольником в c . h Увеличенный вид области, ограниченной белым прямоугольником в f . Белые стрелки в г и ч указывают на наличие ( г ) или отсутствие ( ч ) мечения сарколеммы у мышей дикого типа и SSPN-нулевых мышей, соответственно. Длина саркомера ~3 мкм. Масштабная линейка , 10 мкм

Изображение в полный размер

Экзон 3, кодирующий трансмембранные домены 3 и 4 в SSPN, отсутствует в nSPN и µSPN. С помощью иммунофлуоресцентного анализа мы обнаружили, что SSPN является единственной изоформой, которая локализуется на мембране сарколеммы в мышцах дикого типа, в то время как nSPN и µSPN локализуются на внутренних мембранах SR. Эти данные предполагают, что белковые области, кодируемые экзоном 3, которые включают трансмембранные домены 3 и 4, большую внеклеточную петлю и внутриклеточный С-конец, ответственны за локализацию на клеточной поверхности. В подтверждение этого наш предыдущий анализ делеционных мутантов идентифицировал области в большой внеклеточной петле, которые взаимодействуют с интактным тетрамерным (α-, β-, γ-, δ-SG) субкомплексом [9]. , 34, 37].

Наноспан обогащен мышечными волокнами типа I и снижен при МДД

Некоторые формы мышечной дистрофии вызываются генетическими мутациями в генах, кодирующих белковые компоненты DGC. Мышечная дистрофия Дюшенна (МДД) вызывается мутациями в гене дистрофина, приводящими к прогрессирующей мышечной атрофии и слабости [49]. Дистрофин и другие компоненты DGC теряются из сарколеммы в мышцах у пациентов с МДД. Используя аффинно очищенные антитела к nSPN, мы исследовали экспрессию nSPN в мышцах пациентов с МДД с помощью иммуноблоттинга и непрямой иммунофлуоресценции. Мы обследовали нескольких пациентов с МДД с первичными мутациями дистрофина и отсутствием определяемого белка дистрофина. Анализы непрямой иммунофлуоресценции с антителами против С-конца дистрофина подтверждают полное отсутствие дистрофина в сарколемме МДД (данные не показаны). Без дистрофина DGC снижается, вероятно, в результате быстрой деградации белка. Криосрезы скелетных мышц здоровых пациентов и пациентов с МДД исследовали на экспрессию nSPN с помощью непрямой иммунофлуоресценции. В поперечных срезах мы наблюдали характер внутриклеточного окрашивания nSPN в некоторых, но не во всех волокнах в нормальных биопсиях скелетных мышц человека (рис. 8a), что свидетельствует о специфичной для типа волокна экспрессии. В экспериментах по совместному окрашиванию с медленными (тип I) и быстрыми (тип II) антителами к тяжелой цепи миозина (MHC) мы обнаружили, что экспрессия nSPN ограничивается медленно сокращающимися мышечными волокнами у нормальных здоровых контролей (рис. 8a). Точно так же nSPN сильно экспрессируется в медленных волокнах у пациентов с МДД (рис. 8b). Иммуноблот-анализ показывает резкое снижение уровней nSPN в лизатах белков МДД по сравнению с контролем. Это может быть связано с уменьшением количества медленных волокон в образцах МДД (рис. 8с). Теперь мы показываем, что белок μSPN резко снижается в образцах лизата мышечного белка при МДД с помощью иммуноблоттинга (рис. 8c). Точно так же экспрессия nSPN была снижена в мышечных лизатах DMD по сравнению с нормальным контролем (рис. 8c). Блоты µSPN и nSPN в контроле и DMD получены при идентичном воздействии антитела, которое перекрестно реагирует с обоими белками (рис. 8c). Эти данные свидетельствуют о том, что nSPN и µSPN находятся в относительно равных количествах в контрольной скелетной мышце человека.

nSPN проявляет специфичную для типа волокна экспрессию в скелетных мышцах человека. a , b Локализация nSPN в биоптатах скелетных мышц, взятых у контрольного человека ( a ) и пациентов с МДД ( b ). Криосрезы поперечных мышц (8 мкм) окрашивали аффинно-очищенными антителами к nSPN (Rabbit 20) и выявляли с использованием FITC ( зеленый ). Чтобы определить, экспрессируется ли nSPN предпочтительно в мышцах с быстрым или медленным сокращением, срезы окрашивали вместе с MHCfast и MHCslow, как указано. nSPN предпочтительно экспрессируется во внутриклеточных мембранных компартментах медленно сокращающихся мышц. Объединенные изображения показаны в правые панели. Масштабная линейка , 20 мкм. c Лизаты скелетных мышц из нормального контроля и биоптатов МДД анализировали с помощью электрофореза в SDS-полиакриламидном геле и подвергали иммуноблотингу с использованием антител, распознающих SSPN, µSPN и nSPN. Уровни экспрессии белков SSPN и µSPN резко снижены в мышечных лизатах МДД. nSPN лишь умеренно снижается в образцах DMD. Белковые гели, окрашенные кумасси синим ( CB ), показаны в качестве контроля загрузки. Маркеры молекулярной массы (кДа) представлены на оставил

Изображение полного размера

Обсуждение

В текущем исследовании мы сообщаем о выделении nSPN, альтернативно сплайсированной изоформы SSPN. nSPN имеет только один домен TM и локализован в SR. Более того, экспрессия nSPN повышена в области SR с центром на Z-линии, ZSR и триадном SR, в то время как минимально присутствует в области LSR SR с центром на M-линии (рис. 9). Фактически, nSPN не сохраняется с помощью хроматографии sWGA, первого этапа очистки DGC, что позволяет предположить, что он не связывается с белками, содержащими модификацию O-GlcNAc. Таким образом, nSPN отделяют от DGC на ранней стадии фракционирования. В совокупности эти данные демонстрируют, что nSPN не является неотъемлемым компонентом DGC, который присутствует в сарколемме.

Альтернативный сплайсинг дает SSPN, µSPN и nSPN с различными субклеточными мембранными локализациями. Схематическая диаграмма иллюстрирует мембраны сарколеммы, SR и Т-трубочек и их расположение относительно мышечного саркомера. SR состоит из трех отдельных областей: триадная область, граничащая с Т-трубочками (триадическая SR), область поперек Z-линии (ZSR) и область поперек М-линии (LSR). Обратите внимание, что ZSR и LSR представлены в легких фракциях SR, а тройной SR представлен в тяжелых фракциях SR. , верхнее левое увеличение , представляет собой схематическую диаграмму, показывающую локализацию SSPN в сарколемме, где он является основным компонентом DGC. SSPN представлен в виде четырехтрансмембранного белка с цветовой схемой, как показано на рис. 1. Саркогликаны (α-, β-, γ-, δ-SG; оранжевый ) изображены как трансмембранные овальные формы . СГ и ССПН образуют плотный подкомплекс внутри РСК. Дистрофин (не показан) взаимодействует с β-DG на цитоплазматической стороне мембраны сарколеммы и обеспечивает связь с актиновым цитоскелетом. Дистрогликан (не показан) служит рецептором лигандов внеклеточного матрикса. увеличение в правом верхнем углу представляет собой схематическую иллюстрацию мембран SR, где nSPN и µSPN (цветовая схема, как описано на рис. 1) обогащены и связаны с подмножеством SG (δ-SG, δ-SG3 и γ -SG; оранжевый ) [26, 50]. Триадные области SR содержат δ-SG3, nSPN и µSPN (, нижнее увеличение ), но не содержат δ-SG и γ-SG, как описано ранее [26, 50]. Данные двухфотонной лазерной сканирующей микроскопии показывают, что nSPN в основном связан с ZSR и триадным SR и лишь в минимальной степени с LSR. В то время как продемонстрирована белковая экспрессия изоформ nSPN, µSPN и SG в SR, неясно, образуют ли эти белки субкомплекс внутри этих внутриклеточных мембранных структур, что будет предметом будущих исследований

Изображение полного размера

Мы идентифицировали два белка, полученных в результате альтернативного сплайсинга мРНК SSPN, обозначенных как microspan (µSPN) [25] и nanospan (nSPN) (настоящая статья). SSPN, µSPN и nSPN имеют один и тот же первый трансмембранный домен, который кодируется экзоном 1. µSPN и nSPN лишены трансмембранных доменов 3 и 4, а также большой внеклеточной петли (LEL), специфичной для SSPN. Ни µSPN, ни nSPN не связаны с DGC в сарколемме, что позволяет предположить, что их функции полностью отличаются от функций SSPN, предполагая, что домены, уникальные для SSPN (т. е. TM3, TM4 и LEL), могут содержать домен, нацеленный на сарколемму. (с) (Рис. 9). µSPN локализуется в SR, и мы показали, что сверхэкспрессия µSPN вызывает серьезное нарушение развития триад в скелетных мышцах трансгенных мышей [25].

Несколько компонентов DGC были локализованы во внутриклеточных мембранных структурах скелетных мышц. Ueda и коллеги сообщили об экспрессии как δ-, так и γ-SG в SR в дополнение к их хорошо известной локализации в сарколемме [23]. Интересно, что вариант сплайсинга δ-SG (δ-SG3), локализующийся в SR, был идентифицирован исследовательской группой Coral-Vázquez [26]. В δ-SG3 отсутствуют 122 С-концевых аминокислот полноразмерного δ-SG, включая консервативный внеклеточный домен, богатый Cys. С-конец δ-SG3 состоит из 10 аминокислот, которые кодируются вновь идентифицированным экзоном 5b [26, 50]. Хотя мы демонстрируем белковую экспрессию изоформ nSPN, µSPN и SG в SR, неясно, образуют ли эти белки субкомплекс внутри этих внутриклеточных мембранных структур. Учитывая тесную биохимическую связь комплекса SG-SSPN с сарколеммой, вполне возможно, что в SR поперечнополосатых мышц присутствует вариация в подкомплексе SG-SSPN. Кроме того, идентификация нескольких вариантов сплайсинга, которые локализованы исключительно в SR, предполагает, что эти белки могут функционировать в Ca 9.0014 2+ регламент (рис. 9). Эта гипотеза дополнительно подкрепляется наблюдением, что мышиные и хомячковые модели дефицита δ-SG демонстрируют аберрантную внутриклеточную обработку Ca ²⁺ в скелетных мышцах [26, 50, 51]. Будущие исследования будут сосредоточены на определении того, действительно ли изоформы SG-SSPN, локализованные в SR, образуют субкомплекс и влияют ли возмущения в комплексе на внутриклеточные уровни Ca ²⁺ .

Выводы

• В настоящей работе мы идентифицируем nSPN как альтернативно сплайсированную изоформу SSPN, которая образуется в результате сплайсинга экзона 1 с экзоном 4. Экзон 4 кодирует шесть аминокислот. Предполагается, что nSPN содержит только один трансмембранный домен, так что N- и C-концевые области находятся на люминальной и цитозольной поверхностях мембраны соответственно.

• Анализ экспрессии генов показывает, что nSPN богаты скелетными и сердечными мышцами.

• Используя несколько подходов, включая биохимическое фракционирование и TPLSM, мы продемонстрировали, что nSPN локализован в специфических структурах на мембранах SR, особенно обогащен в ZSR и триадном SR, и гораздо менее сильно экспрессирован в областях LSR с центром в M-линии, как показано на рис. 9.

• Потеря SSPN и µSPN путем направленной делеции экзона 2, интрона 2 и экзона 3 не влияет на локализацию nSPN в SR, но дефицит SSPN действительно приводит к увеличению количества nSPN, которые не связаны с DGC.

• Экспрессия

  nSPN утрачена в мышцах мышей Sgcd ^-/- , модели поясно-конечностной мышечной дистрофии типа 2F.

• В биоптатах мышц человека экспрессия nSPN ограничена медленными мышечными волокнами. Экспрессия nSPN снижена, но не отсутствует в скелетных мышцах при мышечной дистрофии Дюшенна.

• Таким образом, альтернативный сплайсинг мРНК SSPN приводит к образованию трех изоформ белка (SSPN, µSPN и nSPN), которые отличаются количеством трансмембранных доменов, влияющих на ассоциацию субклеточных мембран в отдельные белковые комплексы.

Сокращения

AR-LGMD:

Аутосомно-рецессивная мышечная дистрофия пояса конечностей

ДГ:

Дистрогликан

РСК:

Дистрофин-гликопротеиновый комплекс

ДМД:

Мышечная дистрофия Дюшенна

нСПН:

Наноспан

ТГ:

Саркогликан

SHG:

Генерация второй гармоники

СР:

Саркоплазматический ретикулум

SSPN:

Саркоспан

TPLSM:

Двухфотонная лазерная сканирующая микроскопия

мкСПН:

Микроспан

Ссылки

1. «>

   Кросби Р.Х., Хайуэй Дж., Вензке Д.П., Ли Дж.К., Кэмпбелл К.П. Саркоспан: трансмембранный компонент комплекса дистрофин-гликопротеин массой 25 кДа. Дж. Биол. Хим. 1997; 272:31221–4.

   КАС Статья пабмед Google ученый

2. Эрвасти Дж.М., Кэмпбелл К.П. Гликопротеины, ассоциированные с дистрофином: их возможная роль в патогенезе мышечной дистрофии Дюшенна. Mol Cell Biol Hum Dis Ser. 1993; 3: 139–66.

   КАС пабмед Google ученый

3. Кэмпбелл К.П., Каль С.Д. Ассоциация дистрофина и интегрального мембранного гликопротеина. Природа. 1989; 338: 259–62.

   КАС Статья пабмед Google ученый

4. Эрвасти Дж.М., Каль С.Д., Кэмпбелл К.П. Очистка дистрофина из скелетных мышц. Дж. Биол. Хим. 1991; 266:9161–5.

   КАС пабмед Google ученый

5. «>

   Эрвасти Дж.М., Олендик К., Каль С.Д., Гавер М.Г., Кэмпбелл К.П. Дефицит гликопротеинового компонента дистрофинового комплекса в дистрофической мышце. Природа. 1990;345:315–9.

   КАС Статья пабмед Google ученый

6. Эрвасти Дж.М., Кэмпбелл К.П. Мембранная организация дистрофин-гликопротеинового комплекса. Клетка. 1991;66:1121–31.

   КАС Статья пабмед Google ученый

7. Йошида М., Одзава Э. Гликопротеиновый комплекс, прикрепляющий дистрофин к сарколемме. Дж Биохим. 1990; 108: 748–52.

   КАС Статья пабмед Google ученый

8. Алламанд В., Кэмпбелл К.П. Животные модели мышечной дистрофии: ценные инструменты для разработки методов лечения. Хум Мол Жене. 2000;9: 2459–67.

   КАС Статья пабмед Google ученый

9. «>

   Кросби Р. Х., Лебаккен С. С., Холт К. Х., Вензке Д. П., Штрауб В., Ли Дж. К., Грэди Р. М., Чемберлен Дж. С., Сейнс Дж. Р., Кэмпбелл К. П. Нацеливание на мембрану и стабилизация саркоспана опосредованы саркогликановым субкомплексом. Джей Селл Биол. 1999; 145:153–65.

   КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

10. Холт К.Х., Лим Л.Е., Штрауб В., Вензке Д.П., Дюкло Ф., Андерсон Р.Д., Дэвидсон Б.Л., Кэмпбелл К.П. Функциональное спасение саркогликанового комплекса у хомяка Bio 14.6 с использованием переноса гена d-саркогликана. Мол Ячейка. 1998; 1:841–8.

    КАС Статья пабмед Google ученый

11. ДиФранко М., Вудс К.Э., Капоте Дж., Вергара Дж.Л. В дистрофических скелетных мышечных волокнах обнаруживаются изменения на уровне кальциевых микродоменов. Proc Natl Acad Sci U S A. 2008; 105:14698–703.

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

12. «>

    Вудс К.Э., Ново Д., ДиФранко М., Капоте Дж., Вергара Дж.Л. Распространение в системе поперечных канальцев и зависимость высвобождения кальция от напряжения в нормальных и mdx мышечных волокнах мышей. Дж. Физиол. 2005; 568: 867–80.

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

13. Вудс К.Э., Ново Д., ДиФранко М., Вергара Д.Л. Высвобождение кальция из саркоплазматического ретикулума, вызванное потенциалом действия, нарушено в мышечных волокнах мышей mdx. Дж. Физиол. 2004; 557: 59–75.

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

14. Лаверинг Р.М., Майклсон Л., Уорд К.В. Деформированные миофибриллы mdx имеют нормальную архитектуру цитоскелета, но измененную связь EC и индуцированную стрессом передачу сигналов Ca2+. Am J Physiol Cell Physiol. 2009 г.;297:C571–580.

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

15. «>

    Андерссон Д.С., Мели А.С., Рейкен С., Бетценхаузер М.Дж., Уманская А., Шиоми Т., Д’Армьенто Дж., Маркс А.Р. Негерметичные рианодиновые рецепторы у мышей с дефицитом бета-саркогликанов: потенциальный распространенный дефект при мышечной дистрофии. Скелетная мышца. 2012;2:9.

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

16. Fauconnier J, Thireau J, Reiken S, Cassan C, Richard S, Matecki S, Marks AR, Lacampagne A. Leaky RyR2 вызывает желудочковые аритмии при мышечной дистрофии Дюшенна. Proc Natl Acad Sci U S A. 2010;107:1559–64.

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

17. Беллинджер А.М., Рейкен С., Карлсон С., Монгилло М., Лю Х., Ротман Л., Матецки С., Лакампан А., Маркс А.Р. Каналы высвобождения кальция из гипернитрозилированных рианодиновых рецепторов негерметичны в дистрофических мышцах. Нат Мед. 2009 г.;15:325–30.

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

18. Kombairaju P, Kerr JP, Roche JA, Pratt SJ, Lovering RM, Sussan TE, Kim JH, Shi G, Biswal S, Ward CW. Генетическое замалчивание Nrf2 усиливает X-ROS в мышцах с дефицитом дисферлина. Фронт Физиол. 2014;5:57.

    Артикул пабмед ПабМед Центральный Google ученый

19. Хайралла Р.Дж., Ши Г., Сбрана Ф., Проссер Б.Л., Боррото С., Мазайтис М.Дж., Хоффман Э.П., Махуркар А., Сакс Ф., Сунь Ю., Чен Ю.В., Райтери Р., Ледерер В.Дж., Дорси С.Г., Уорд К.В. Микротрубочки лежат в основе дисфункции при мышечной дистрофии Дюшенна. Научный сигнал. 2012;5:ra56.

    Артикул пабмед Google ученый

20. Проссер Б.Л., Эрнандес-Очоа Э.О., Шнайдер М.Ф. S100A1 и кальмодулин регулируют рианодиновый рецептор в поперечнополосатых мышцах. Клеточный кальций. 2011;50:323–31.

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

21. Гунасекера С.А., Лам К.К., Миллай Д.П., Сарджент М.А., Хаджар Р.Дж., Краниас Э.Г., Молкентин Д.Д. Уменьшение мышечной дистрофии у мышей за счет сверхэкспрессии SERCA в скелетных мышцах. Джей Клин Инвест. 2011; 121:1044–52.

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

22. Гунасекера С.А., Дэвис Дж., Квонг Дж.К., Аккорнеро Ф., Вей-Лапьер Л., Сарджент М.А., Дирксен Р.Т., Молкентин Д.Д. Усиленный приток Ca(2)(+) от STIM1-Orai1 вызывает мышечную патологию в мышиных моделях мышечной дистрофии. Хум Мол Жене. 2014;23:3706–15.

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

23. Ueda H, Ueda K, Baba T, Ohno S. Локализация дельта- и гамма-саркогликанов в саркоплазматическом ретикулуме скелетных мышц. J Гистохим Цитохим. 2001; 49: 529–38.

    КАС Статья пабмед Google ученый

24. Эстрада Ф.Дж., Морнет Д., Росас-Варгас Х., Ангуло А., Эрнандес М., Беккер В., Рендон А., Рамос-Кури М., Корал-Васкес Р.М. Новая изоформа дельта-саркогликана локализована в саркоплазматическом ретикулуме скелетных мышц мыши. Biochem Biophys Res Commun. 2006; 340:865–71.

    КАС Статья пабмед Google ученый

25. Миллер Г., Питер А.К., Эспиноза Э., Хайуэй Дж., Кросби Р.Х. Гиперэкспрессия microspan, нового компонента саркоплазматического ретикулума, вызывает тяжелую мышечную патологию с аномалиями триад. J Muscle Res Cell Motil. 2006; 27: 545–58.

    КАС Статья пабмед Google ученый

26. «>

    Соларес-Перес А., Альварес Р., Кросби Р.Х., Вега-Морено Дж., Медина-Монарес Дж., Эстрада Ф.Дж., Ортега А., Корал-Васкес Р. Измененный кальциевый насос и вторичный дефицит гамма-саркогликана и микроспан в саркоплазматическом мембраны ретикулума, выделенные от мышей с нокаутом дельта-саркогликана. Клеточный кальций. 2010;48:28–36.

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

27. Heighway J, Knapp T, Boyce L, Brennand S, Field JK, Betticher DC, Ratschiller D, Gugger M, Donovan M, Lasek A, Rickert P. Профилирование экспрессии первичного немелкоклеточного рака легкого для идентификации мишени . Онкоген. 2002; 21:7749–63.

    КАС Статья пабмед Google ученый

28. Лебаккен С.С., Вензке Д.П., Хрстка Р.Ф., Консолино К.М., Фолкнер Дж.А., Уильямсон Р.А., Кэмпбелл К.П. Мыши с дефицитом саркоспана сохраняют нормальную мышечную функцию. Мол Селл Биол. 2000; 20:1669–77.

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

29. Маршалл Дж. Л., Холмберг Дж., Чоу Э., Окампо А. С., О Дж., Ли Дж., Питер А. К., Мартин П. Т., Кросби-Ватсон Р. Х. Sarcospan-зависимая активация Akt необходима для экспрессии атрофина и регенерации мышц. Джей Селл Биол. 2012;197:1009–27.

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

30. Rosemblatt M, Hidalgo C, Vergara C, Ikemoto N. Иммунологические и биохимические свойства мембран поперечных канальцев, выделенных из скелетных мышц кролика. Дж. Биол. Хим. 1981; 256:8140–8.

    КАС пабмед Google ученый

31. Саббадини Р.А., Окамото В.Р. Распределение активности АТФазы в очищенных мембранах поперечных канальцев. Арх Биохим Биофиз. 1983;223:107–19.

    КАС Статья пабмед Google ученый

32. Кэмпбелл К.П., Франзини-Армстронг С., Шаму А.Е. Дальнейшая характеристика легких и тяжелых везикул саркоплазматического ретикулума. Идентификация «ножек саркоплазматического ретикулума», связанных с тяжелыми везикулами саркоплазматического ретикулума. Биохим Биофиз Акта. 1980; 602: 97–116.

    КАС Статья пабмед Google ученый

33. Heighway J, Betticher DC, Hoban PR, Altermatt HJ, Cowen R. Коамплификация в опухолях KRAS2, гена рецептора инозит-1,4,5-трифосфата 2 типа и нового гена человека, KRAG. Геномика. 1996; 35: 207–14.

    КАС Статья пабмед Google ученый

34. Миллер Г., Ван Э.Л., Нассар К.Л., Питер А.К., Кросби Р.Х. Структурно-функциональный анализ саркогликан-саркоспанового субкомплекса. Разрешение ячейки опыта. 2007;313:639–51.

    КАС Статья пабмед Google ученый

35. Кросби Р.Х., Ямада Х., Вензке Д.П., Лисанти М.П., ​​Кэмпбелл К.П. Кавеолин-3 не является неотъемлемым компонентом комплекса дистрофина-гликопротеина. ФЭБС лат. 1998; 427: 279–82.

    КАС Статья пабмед Google ученый

36. Takekura H, Flucher BE, Franzini-Armstrong C. Последовательная стыковка, молекулярная дифференцировка и расположение соединений T-трубочек/SR в развивающихся скелетных мышцах мышей. Дев биол. 2001;239: 204–14.

    КАС Статья пабмед Google ученый

37. Кросби Р.Х., Лим Л.Е., Мур С.А., Хирано М., Хейс А.П., Майбаум С.В., Коллин Х., Довико С.А., Столле К.А., Фардо М., Том Ф.М., Кэмпбелл К.П. Молекулярная и генетическая характеристика саркоспана: понимание взаимодействия саркогликан-саркоспан. Хум Мол Жене. 2000;9:2019–27.

    КАС Статья пабмед Google ученый

38. Дурбидж М., Кон Р.Д., Хрстка Р.Ф., Мур С.А., Алламанд В., Дэвидсон Б.Л., Уильямсон Р.А., Кэмпбелл К.П. Нарушение гена бета-саркогликана свидетельствует о сложности патогенеза поясно-конечностной мышечной дистрофии 2Е типа. Мол Ячейка. 2000;5:141–51.

    КАС Статья пабмед Google ученый

39. Корал-Васкес Р., Кон Р.Д., Мур С.А., Хилл Дж.А., Вайс Р.М., Дэвиссон Р.Л., Штрауб В., Барреси Р., Бансал Д., Хрстка Р.Ф., Уильямсон Р., Кэмпбелл К.П. Нарушение комплекса саркогликан-саркоспан в гладких мышцах сосудов: новый механизм кардиомиопатии и мышечной дистрофии. Клетка. 1999;98:465–74.

    КАС Статья пабмед Google ученый

40. Дюкло Ф., Штрауб В., Мур С.А., Вензке Д. П., Хрстка Р.Ф., Кросби Р.Х., Дурбидж М., Лебаккен С.С., Эттингер А.Дж., ван дер Меулен Дж., Холт К.Х., Лим Л.Е., Санес Дж.Р., Дэвидсон Б.Л., Фолкнер Дж.А. , Уильямсон Р., Кэмпбелл К.П. Прогрессирующая мышечная дистрофия у мышей с дефицитом альфа-саркогликанов. Джей Селл Биол. 1998; 142:1461–71.

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

41. Маршалл Дж.Л., Чоу Э., О Дж., Квок А., Буркин Д.Дж., Кросби-Уотсон Р.Х. Для экспрессии дистрофина и атрофина требуется саркоспан: потеря интегрина альфа7 усугубляет недавно обнаруженный мышечный фенотип у мышей с отсутствием саркоспана. Хум Мол Жене. 2012;21:4378–93.

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

42. Парватияр М.С., Маршалл Дж.Л., Нгуен Р.Т., Джордан М.С., Ричардсон В.А., Роос К.П. и Кросби-Уотсон Р.Х. Саркоспан регулирует реакцию сердца на изопротеренол и предотвращает кардиомиопатию, связанную с мышечной дистрофией Дюшенна. Ассоциация J Am Heart. 2015; 4:1–24.

43. Хак А.А., Лам М.Ю., Кордье Л., Шотурма Д.И., Ли К.Т., Хадхази М.А., Хадхази М.Р., Суини Х.Л., МакНалли Э.М. Дифференциальная потребность в отдельных саркогликанах и дистрофине при сборке и функционировании комплекса дистрофин-гликопротеин. Дж. Клеточные науки. 2000; 113 (часть 14): 2535–44.

    КАС пабмед Google ученый

44. Ревель JP. Саркоплазматический ретикулум перстнещитовидной мышцы летучей мыши. Джей Селл Биол. 1962; 12: 571–88.

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

45. Мобли Б.А., Айзенберг Б.Р. Размеры компонентов в скелетной мышце лягушки, измеренные методами стереологии. J Gen Physiol. 1975; 66: 31–45.

    КАС Статья пабмед Google ученый

46. «>

    Айзенберг Р.С., Маккарти Р.Т., Милтон Р.Л. Паралич волокон скелетных мышц лягушки антагонистом кальция Д-600. Дж. Физиол. 1983;341:495–505.

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

47. ДиФранко М., Крамерова И., Вергара Дж.Л., Спенсер М.Дж. Ослабленное высвобождение Ca(2+) в мышиной модели мышечной дистрофии пояса конечностей 2А. Скелетная мышца. 2016;6:11.

    Артикул пабмед ПабМед Центральный Google ученый

48. Vassilopoulos S, Thevenon D, Rezgui SS, Brocard J, Chapel A, Lacampagne A, Lunardi J, Dewaard M, Marty I. Триадины не являются триад-специфическими белками: два новых триадина скелетных мышц, возможно, участвуют в архитектуре саркоплазматический ретикулум. Дж. Биол. Хим. 2005; 280:28601–9.

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

49. «>

    Хоффман Э.П., Браун Р.Х., Кункель Л.М. Дистрофин: белковый продукт очага мышечной дистрофии Дюшенна. Клетка. 1987; 51: 919–28.

    КАС Статья пабмед Google ученый

50. Соларес-Перес А., Санчес Х.А., Зентелла-Дехеса А., Гарсия М.С., Корал-Васкес Р.М. Переходные процессы внутриклеточного Ca2+ в скелетных мышцах мышей с нокаутом дельта-саркогликана. Биохим Биофиз Акта. 2010; 1800: 373–9.

    КАС Статья пабмед Google ученый

51. Ивата Й., Катаносака Й., Шиджун З., Кобаяши Й., Ханада Х., Шигекава М., Вакабаяши С. Защитные эффекты препаратов, работающих с Са2+, против аномального гомеостаза Са2+ и повреждения клеток в миопатических клетках скелетных мышц. Биохим Фармакол. 2005; 70: 740–51.

    КАС Статья пабмед Google ученый

Скачать ссылки

Благодарности

Мы благодарим Эрику Эспинозу и Марбелью Хинонес за техническую помощь.

Финансирование

Мы также признаем следующие гранты для поддержки: Грант на развитие ученых Ассоциации мышечной дистрофии (MDA3704) для GM; NIH T32 GM65823, стипендия Эдит Хайд, стипендия Урсулы Мандель и стипендия Гарольда и Лилиан Краус Американской кардиологической ассоциации для докторантов в AKP; Стипендия исследовательской программы бакалавриата Калифорнийского университета в Лос-Анджелесе — Медицинский институт Говарда Хьюза для E.L.W.; НИЗ Т32 AR065972 Стипендия JC; Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología (CONACyT 55199), Мексика, в R.M.C.-V.; NIH AR067422 для M.DiF.; NIH AR041802, NIH AR063710 и MDA276084 для СП; NIH AR048179, NIH UL1TR000124, MDA 416364 и MDA 274143 для RHC-W.

Наличие данных и материалов

Неприменимо.

Вклад авторов

AKP и GM с помощью ELW создали и утвердили поликлональные антитела кролика 3 и 20 и провели анализ образцов мышц с использованием непрямого иммунофлуоресцентного анализа. GM клонировала nSPN и провела нозерн-блоттинг с помощью ELW. JH разработал и провел скрининг библиотеки кДНК с использованием нескольких зондов SSPN и анализа ОТ-ПЦР. AKP проанализировала фракции после очистки дистрофина-гликопротеина на наличие nSPN. JC и MDiF выполнили все эксперименты TPLSM с использованием антител, полученных в этом исследовании, в дополнение к коммерчески доступным. JC подготовил схематическую иллюстрацию на рис. 8 после консультации со всеми авторами. AS-P очистила мембраны скелетных мышц и провела иммуноблот-анализ nSPN в препаратах SR и Т-трубочек во время исследовательской стажировки, которая поддержала ее путешествие после получения докторской степени. исследовательская группа (наставник, RMC-V) в лабораторию RHC-W. RMC-V, JV и RHC-W консультировали по всем экспериментам и анализу данных. Все авторы участвовали в нескольких проектах рисунков и рукописи во время подготовки к представлению в журнал. Все авторы прочитали и одобрили окончательный вариант рукописи.

Информация об авторах

Неприменимо.

Конкурирующие интересы

Авторы заявляют об отсутствии конкурирующих интересов.

Согласие на публикацию

Неприменимо.

Этическое одобрение и согласие на участие

Это исследование не было клиническим. В исследовании использовались выброшенные человеческие ткани, которые были деидентифицированы и приобретены в соответствии с утвержденными исключениями IRB. Все протоколы обращения с животными и процедуры выполнялись в соответствии с рекомендациями, установленными Комитетом по институциональному уходу и использованию животных Калифорнийского университета в Лос-Анджелесе.

Примечание издателя

Springer Nature остается нейтральной в отношении юрисдикционных претензий в опубликованных картах и ​​институциональной принадлежности.

Информация об авторе

Примечания автора

Авторы и организации

1. Кафедра интегративной биологии и физиологии, Калифорнийский университет, Лос-Анджелес, 610 Charles E. Young Drive East, Terasaki Life Sciences Building, Los Angeles, CA,

   , США

   Анджела К. Питер, Гейнор Миллер, Эмили Л. Ван и Рашель Х. Кросби-Уотсон

2. Кафедра неврологии, Медицинская школа Дэвида Геффена, Калифорнийский университет, Лос-Анджелес, 610 Charles E. Young Drive East, Terasaki Life Sciences Building, Лос-Анджелес, Калифорния,

   , США

   Джоана Капоте и Рашель Х. Crosbie-Watson

3. Центр мышечной дистрофии Дюшенна, Калифорнийский университет, Лос-Анджелес, Лос-Анджелес, Калифорния, США

   Joana Capote, Marino DiFranco, Julio Vergara и Rachelle H. Crosbie-Watson

4. Кафедра физиологии, Медицинская школа Дэвида Геффена, Калифорнийский университет, Лос-Анджелес, Лос-Анджелес, Калифорния, США Instituto Politécnico Nacional, Мехико, Мексика

   Alhondra Solares-Pérez и Ramón M. Coral-Vázquez

5. Cancer Communications and Consultancy Ltd, Knutsford, Cheshire, UK

   Jim Heighway

6. Институт молекулярной биологии, Калифорнийский университет, Лос-Анджелес, Лос-Анджелес, Калифорния, США

   Rachelle H. Crosbie-Watson

7. Текущий адрес: Институт Biofrontiers, Департамент молекулярного, клеточного и развития Biology, University of Colorado, Boulder, CO, USA

   Angela K. Peter

8. Текущий адрес: Кафедра онкологии и метаболизма, Университет Шеффилда, Sheffield, UK

   Гейнор Миллер

Авторы

1. Анджела К. Питер

   Просмотр публикаций автора

   Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

2. Gaynor Miller

   Просмотр публикаций автора

   Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

3. Joana Capote

   Просмотр публикаций автора

   Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Академия

4. Marino DiFranco

   Просмотр публикаций автора

   Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

5. Alhondra Solares-Pérez

   Просмотр публикаций автора

   Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

6. Emily L. Wang

   Просмотр публикаций автора

   Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

7. Jim Heighway

   Просмотр публикаций автора

   Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

8. Ramón M. Coral-Vázquez

   Просмотр публикаций автора

   Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

9. Julio Vergara

   Просмотр публикаций автора

   Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

10. Rachelle H. Crosbie-Watson

    Просмотр публикаций автора

    Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

Автор, ответственный за переписку

Рэйчел Х. Кросби-Уотсон.

Дополнительные файлы

Дополнительный файл 1: Рисунок S1.

Транскрипты мРНК nSPN преобладают в скелетных и сердечных мышцах. ОТ-ПЦР проводили на кДНК, выделенной из различных тканей человека (скелетных мышц, яичка, толстой кишки, сердца, головного мозга, молочной железы и костного мозга), с использованием прямого праймера в экзоне 1 и обратного праймера в экзоне 4, как показано на рис. 1с. Продукты ПЦР были получены для мкСПН (179п.н.) и nSPN (90 п.н.). ОТ-ПЦР, выполненная без матричной ДНК, показана как отрицательный контроль (отрицательный контроль). Маркеры молекулярного размера указаны слева. (PDF 348 КБ)

Дополнительный файл 2: Рисунок S2.

Локализация Nanospan соответствует триадной локализации в растянутых скелетных мышечных волокнах. TPLSM-исследование локализации nSPN в растянутых волокнах скелетных мышц FDB мышей дикого типа (C57-BL/6J). Панели A и B представляют собой изображения TPLSM мышцы FDB, одновременно меченной антителами nSPN (Alexa 488) и α-актинина (Texas Red). На панели C показано наложение изображений на панелях A и B. На панелях D и E показаны одновременные изображения TPLSM иммунолокализации nSPN и SHG, полученные из мышцы FDB, меченной антителом против nSPN (Alexa 488). Панель F показывает наложение изображений на панелях D и E. Панель G соответствует наложению профилей флуоресценции Alexa 488 (nSPN, зеленая кривая) и Texas Red (α-актинин, красная кривая) волокон, показанных на панелях. А–С. Панель H соответствует наложению профилей излучения Alexa 488 (nSPN, зеленая кривая) и SHG (синяя кривая) волокон, показанных на панелях D – F (профили взяты из областей, отмеченных прямоугольниками). Схематические диаграммы в нижней части панелей G и H показывают соответствие профилей интенсивности основным признакам саркомера. Саркомерная длина волокон, представленных на этом рисунке, составляет ~ 3,7 мкм. Масштабная линейка, 10 мкм. (PDF 2028 кб)

Дополнительный файл 3: Рисунок S3.

nSPN не связан с DGC. Скелетные микросомы из мышц дикого типа (WT) и мышц с дефицитом SSPN солюбилизировали дигитонином и подвергали обогащению sWGA, что представляет собой первый этап очистки DGC. Иммуноблот-анализ исходного материала (старт), пустоты sWGA и элюата sWGA, зондированного антителами к α-DG (в качестве маркера для очистки DGC) и nSPN (R20). (PDF 118 КБ)

Права и разрешения

Открытый доступ Эта статья распространяется в соответствии с условиями международной лицензии Creative Commons Attribution 4.0 (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/), которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии вы должным образом указываете автора (авторов) и источник, предоставляете ссылку на лицензию Creative Commons и указываете, были ли внесены изменения. Отказ от права Creative Commons на общественное достояние (http://creativecommons.org/publicdomain/zero/1.0/) применяется к данным, представленным в этой статье, если не указано иное.

Перепечатки и разрешения

Об этой статье

PRIME PubMed | Наноспан, альтернативно сплайсированная изоформа саркоспана, локализуется в саркоплазматическом ретикулуме скелетных мышц и отсутствует при мышечной дистрофии пояса конечностей. с образованием плотного субкомплекса внутри дистрофин-гликопротеинового комплекса, который охватывает сарколемму и взаимодействует с ламинином во внеклеточном матриксе.

Гиперэкспрессия SSPN облегчает течение мышечной дистрофии Дюшенна на мышиных моделях.

МЕТОДЫ

Стандартные подходы к клонированию были использованы для идентификации наноспана, и были созданы и проверены поликлональные антитела, специфичные для наноспана. Биохимическая изоляция мембран скелетных мышц и двухфотонная лазерная сканирующая микроскопия использовались для анализа локализации нанопромежутков в мышцах на нескольких мышиных моделях. Биоптаты мышечной дистрофии Дюшенна анализировали с помощью иммуноблот-анализа белковых лизатов, а также непрямого иммунофлуоресцентного анализа криосрезов мышц.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Наноспан представляет собой альтернативно сплайсированную изоформу саркоспана. В то время как SSPN имеет четыре трансмембранных домена и является основным компонентом сарколеммального комплекса дистрофин-гликопротеин, наноспан представляет собой трансмембранный белок типа II, который не связан с комплексом дистрофин-гликопротеин. Мы демонстрируем, что наноспан обогащен фракциями саркоплазматического ретикулума (SR) и не присутствует в Т-трубочках. Фракции SR содержат мембраны из трех различных структурных областей: области, граничащей с Т-трубочками (триадическая SR), области SR поперек Z-линии (ZSR) и продольной области SR поперек М-линии (LSR). Анализ изолированных мышц мышей показывает, что наноспан в основном связан с ZSR и триадным SR и лишь в минимальной степени с LSR. Кроме того, наноспан отсутствует в SR скелетной мышцы δ-SG-null (Sgcd-/-), мышиной модели мышечной дистрофии пояса конечностей 2F. Анализ биоптатов скелетных мышц пациентов с мышечной дистрофией Дюшенна показывает, что наноспан преимущественно экспрессируется в волокнах типа I (медленных) как в контрольных образцах, так и в образцах Дюшенна. Кроме того, в биоптатах Дюшенна значительно уменьшается нанодиапазон.

ВЫВОДЫ

Альтернативный сплайсинг белков из комплекса SG-SSPN дает δ-SG3, микроспан и наноспан, которые локализуются в ZSR и триадном SR, где они могут играть роль в регуляции уровней кальция в покое, что подтверждается предыдущими исследованиями. (Estrada et al., Biochem Biophys Res Commun 340:865-71, 2006). Таким образом, в результате альтернативного сплайсинга мРНК SSPN образуются три белковые изоформы (SSPN, microspan и nanospan), различающиеся количеством трансмембранных доменов, влияющих на ассоциацию субклеточных мембран в отдельные белковые комплексы.

Authors+Show Affiliations

Peter AK

Кафедра интегративной биологии и физиологии, Калифорнийский университет, Лос-Анджелес, 610 Charles E. Young Drive East, Terasaki Life Sciences Building, Лос-Анджелес, Калифорния,

, США. Текущий адрес: Институт биограницы, кафедра молекулярной, клеточной и биологии развития, Колорадский университет, Боулдер, Колорадо, США.

Miller G

Кафедра интегративной биологии и физиологии, Калифорнийский университет, Лос-Анджелес, 610 Charles E. Young Drive East, Terasaki Life Sciences Building, Los Angeles, CA,

, США. Текущий адрес: Кафедра онкологии и обмена веществ, Шеффилдский университет, Шеффилд, Великобритания.

Capote J

Кафедра неврологии, Медицинская школа Дэвида Геффена, Калифорнийский университет, Лос-Анджелес, 610 Charles E. Young Drive East, Terasaki Life Sciences Building, Лос-Анджелес, Калифорния,

, США. Центр мышечной дистрофии Дюшенна, Калифорнийский университет, Лос-Анджелес, Лос-Анджелес, Калифорния, США.

DiFranco M

Центр мышечной дистрофии Дюшенна, Калифорнийский университет, Лос-Анджелес, Лос-Анджелес, Калифорния, США. Кафедра физиологии, Медицинская школа Дэвида Геффена, Калифорнийский университет, Лос-Анджелес, Лос-Анджелес, Калифорния, США.

Solares-Pérez A

Sección de Estudios de Posgrado e Investigacion, Высшая школа медицины, Национальный политехнический институт, Мехико, Мексика.

Wang EL

Кафедра интегративной биологии и физиологии, Калифорнийский университет, Лос-Анджелес, 610 Charles E. Young Drive East, Terasaki Life Sciences Building, Лос-Анджелес, Калифорния,

, США.

Heighway J

Cancer Communications and Consultancy Ltd, Натсфорд, Чешир, Великобритания.

Coral-Vázquez RM

Sección de Estudios de Posgrado e Investigacion, Высшая школа медицины, Национальный политехнический институт, Мехико, Мексика.

Vergara J

Центр мышечной дистрофии Дюшенна, Калифорнийский университет, Лос-Анджелес, Лос-Анджелес, Калифорния, США. Кафедра физиологии, Медицинская школа Дэвида Геффена, Калифорнийский университет, Лос-Анджелес, Лос-Анджелес, Калифорния, США.

Crosbie-Watson RH

Кафедра интегративной биологии и физиологии, Калифорнийский университет, Лос-Анджелес, 610 Charles E. Young Drive East, Terasaki Life Sciences Building, Los Angeles, CA,

, США. [email protected]. Кафедра неврологии, Медицинская школа Дэвида Геффена, Калифорнийский университет, Лос-Анджелес, 610 Charles E. Young Drive East, Terasaki Life Sciences Building, Лос-Анджелес, Калифорния,
, США. [email protected]. Центр мышечной дистрофии Дюшенна, Калифорнийский университет, Лос-Анджелес, Лос-Анджелес, Калифорния, США. [email protected]. Институт молекулярной биологии Калифорнийского университета, Лос-Анджелес, Лос-Анджелес, Калифорния, США. [email protected].

MESH

Альтернативные белковые белковые белковые белки, инбреданималскарриер белков, белковые изоформы, невозможные, enslecramer, non non non non non non non non non nem. 9001, non non nem. 9001, non non non vormal, 9006, non non vormal, 9006, 9001, 900, non non newcramer, 900, 9006, 9006, 9006, 900, non non non non non non non non non non non non non non non non non non non non non non non non non reticulum 9006. Gov’t

Language

eng

PubMed ID

28587652

Citation

Peter, Angela K., et al. «Наноспан, альтернативно сплайсированная изоформа саркоспана, локализуется в саркоплазматическом ретикулуме скелетных мышц и отсутствует при мышечной дистрофии пояса конечностей 2F». Скелетные мышцы, vol. 7, нет. 1, 2017, с. 11.

Питер А.К., Миллер Г., Капоте Дж. и др. Наноспан, альтернативно сплайсированная изоформа саркоспана, локализуется в саркоплазматическом ретикулуме скелетных мышц и отсутствует при мышечной дистрофии пояса конечностей 2F. Скелетная мышца . 2017;7(1):11.

Питер, А. К., Миллер, Г., Капоте, Дж., ДиФранко, М., Соларес-Перес, А., Ван, Э. Л., Хайуэй, Дж., Корал-Васкес, Р. М., Вергара, Дж., и Кросби — Уотсон, Р. Х. (2017). Наноспан, альтернативно сплайсированная изоформа саркоспана, локализуется в саркоплазматическом ретикулуме скелетных мышц и отсутствует при мышечной дистрофии пояса конечностей 2F. Скелетная мышца , 7 (1), 11. https://doi.org/10.1186/s13395-017-0127-9

Peter AK, et al. Наноспан, альтернативно сплайсированная изоформа саркоспана, локализуется в саркоплазматическом ретикулуме скелетных мышц и отсутствует при мышечной дистрофии пояса конечностей 2F. Скелетная мышца. 2017 06 6;7(1):11. PubMed PMID: 28587652.

* Названия статей в формате цитирования AMA должны быть в регистре предложений

MLAAMAAPAVANCOUVER

TY — JOUR T1 — Наноспан, альтернативно сплайсированная изоформа саркоспана, локализуется в саркоплазматическом ретикулуме скелетных мышц и отсутствует при мышечной дистрофии пояса конечностей 2F. AU — Питер, Анджела К, AU — Миллер, Гейнор, AU — Капоте, Джоана, AU — ДиФранко, Марино, AU — Соларес-Перес, Альондра, AU — Ван, Эмили Л, AU — Хайвей, Джим, AU — Корал-Васкес, Рамон М, AU — Вергара, Хулио, AU — Кросби-Уотсон, Рэйчел Х, Y1 — 06.06.2017/ ПЯ — 27.02.2017/получил PY — 12.05.2017/принято PY — 2017/6/8/антрез PY — 2017/6/8/опубликовано PY – 27 марта 2018 г./medline KW — мышечная дистрофия Дюшенна KW — Дистрофин KW — Поясно-мышечная дистрофия конечностей кВт — микропромежуток кВт — Наноспан KW — Сарколемма KW — саркоплазматический ретикулум KW — Саркоспан KW — Поперечный канал СП — 11 ЭП — 11 JF — Скелетная мышца JO — Скелетная мышца ВЛ — 7 ИС — 1 N2 — ПРЕДПОСЫЛКИ: Саркоспан (SSPN) представляет собой трансмембранный белок, который взаимодействует с саркогликанами (SG) с образованием плотного субкомплекса в комплексе дистрофин-гликопротеин, который охватывает сарколемму и взаимодействует с ламинином во внеклеточном матриксе. Гиперэкспрессия SSPN облегчает течение мышечной дистрофии Дюшенна на мышиных моделях. МЕТОДЫ. Для идентификации наноспана использовались стандартные подходы к клонированию, а также были созданы и проверены поликлональные антитела, специфичные для наноспана. Биохимическая изоляция мембран скелетных мышц и двухфотонная лазерная сканирующая микроскопия использовались для анализа локализации нанопромежутков в мышцах на нескольких мышиных моделях. Биоптаты мышечной дистрофии Дюшенна анализировали с помощью иммуноблот-анализа белковых лизатов, а также непрямого иммунофлуоресцентного анализа криосрезов мышц. РЕЗУЛЬТАТЫ: Наноспан представляет собой альтернативно сплайсированную изоформу саркоспана. В то время как SSPN имеет четыре трансмембранных домена и является основным компонентом сарколеммального комплекса дистрофин-гликопротеин, наноспан представляет собой трансмембранный белок типа II, который не связан с комплексом дистрофин-гликопротеин. Мы демонстрируем, что наноспан обогащен фракциями саркоплазматического ретикулума (SR) и не присутствует в Т-трубочках. Фракции SR содержат мембраны из трех различных структурных областей: области, граничащей с Т-трубочками (триадическая SR), области SR поперек Z-линии (ZSR) и продольной области SR поперек М-линии (LSR). Анализ изолированных мышц мышей показывает, что наноспан в основном связан с ZSR и триадным SR и лишь в минимальной степени с LSR. Кроме того, наноспан отсутствует в SR скелетной мышцы δ-SG-null (Sgcd-/-), мышиной модели мышечной дистрофии пояса конечностей 2F. Анализ биоптатов скелетных мышц пациентов с мышечной дистрофией Дюшенна показывает, что наноспан преимущественно экспрессируется в волокнах типа I (медленных) как в контрольных образцах, так и в образцах Дюшенна. Кроме того, в биоптатах Дюшенна значительно уменьшается нанодиапазон. ВЫВОДЫ: Альтернативный сплайсинг белков из комплекса SG-SSPN дает δ-SG3, микроспан и наноспан, которые локализуются в ZSR и триадном SR, где они могут играть роль в регуляции уровней кальция в покое, что подтверждается предыдущими исследованиями (Estrada et al. al., Biochem Biophys Res Commun 340:865-71, 2006). Таким образом, в результате альтернативного сплайсинга мРНК SSPN образуются три белковые изоформы (SSPN, microspan и nanospan), различающиеся количеством трансмембранных доменов, влияющих на ассоциацию субклеточных мембран в отдельные белковые комплексы. СН — 2044-5040 UR — https://brain.unboundmedicine.com/medline/citation/28587652/nanospan_an_alternatively_spliced_isoform_of_sarcospan_localizes_to_the_sarcoplasmic_reticulum_in_skeletal_muscle_and_is_absent_in_limb_girdle_muscular_dystrophy_2f_ L2 — https://skeletalmusclejournal.biomedcentral.com/articles/10.1186/s13395-017-0127-9 ДБ — ПРАЙМ ДП — Свободная медицина ER —

Патенты, переданные Private Limited

Патенты, переданные Private Limited

• СИСТЕМА И СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ И МОДЕРЕЦИИ МЕСТОПОЛОЖЕНИЯ ПОДПИСИ В ЭЛЕКТРОННЫХ ДОКУМЕНТАХ

  Номер публикации: 20220309235

  Abstract: Системы и методы для прогнозирования и модерации местоположений подписи включают электронный документ, который должен быть подписан, пользователя электронного документа и пользовательское устройство связи. Пользователь обеспечивает свободный ввод текста в модуль ввода текста системы для требований подписи в документе. Модуль поиска полей подписи анализирует входные данные пользователя на основе эвристических шаблонов обучения и экранов и сопоставляет все страницы документа для размещения полей подписи. Затем система помещает теги подписи в поля для подписи. Пользователь выбирает подписывающие стороны, присутствующие в полях для подписи, и система компилирует теги подписи для этой стороны. Пользователь. используя модуль модератора тега подписи, можно добавлять, удалять или настраивать теги подписи, и пользователь может видеть все соответствующие страницы документа с скомпилированными тегами подписи для целей модерации пользователем.

  Тип: Заявка

  Подано: 28 февраля 2022 г.

  Дата публикации: 29 сентября 2022 г.

  Заявитель: Certinal Software Private Limited

  Изобретатели: Канишка Гош, Кришненду Чаттопадхьяя

• СИСТЕМА И МЕТОД ЭЛЕКТРОННОЙ ПОДПИСИ С ФУНКЦИЕЙ SMART ASSIST

  Номер публикации: 20220311622

  Abstract: Система и способ с функцией интеллектуальной помощи электронной подписи, включающие в себя компьютерную систему получателя, компьютерную систему отправителя, по меньшей мере одну базу данных системы, в которой функция интеллектуальной помощи электронной подписи система при получении электронного документа для подписи извлекает и загружает версию ранее согласованного документа того же документа для сравнения для проверки подлинности данных, связанных с ключевыми значениями в этих двух версиях, перед электронной подписью документа и помечает отклонения, если таковые имеются, «красным флажком». ” и таким образом предупреждает пользователя. Функция Smart Assist генерирует и сохраняет метаданные для каждого документа для ключевых значений, предварительно определенных пользователем, которые затем извлекаются для сравнения. Эти поля метаданных предварительно настраиваются, а также редактируются для добавления новых полей.

  Тип: Заявка

  Подано: 28 февраля 2022 г.

  Дата публикации: 29 сентября 2022 г.

  Заявитель: Certinal Software Private Limited

  Изобретатели: Канишка Гош, Кришненду Чаттопадхьяя

• СИСТЕМА И МЕТОД ПРОГНОЗИРОВАНИЯ МЕСТА ПОДПИСИ В ЭЛЕКТРОННЫХ ДОКУМЕНТАХ

  Номер публикации: 20220309188

  Реферат: Системы и методы для прогнозирования местоположения подписи включают электронный документ, который должен быть подписан, пользователя электронного документа и пользовательское устройство связи. Пользователь обеспечивает свободный ввод текста в модуль ввода текста системы для требований подписи в документе. Модуль поиска полей подписи анализирует вводимые пользователем данные на основе шаблонов эвристического обучения и экранов и отображает все страницы документа для размещения полей подписи. Затем система помещает теги подписи в поля для подписи. Пользователь выбирает подписывающие стороны, присутствующие в полях для подписи, и система компилирует теги подписи для этой стороны.

  Тип: Заявка

  Подано: 28 февраля 2022 г.

  Дата публикации: 29 сентября 2022 г.

  Заявитель: Certinal Software Private Limited

  Изобретатели: Канишка Гош, Кришненду Чаттопадхьяя

• СИСТЕМА И СПОСОБ ПРЕДОСТАВЛЕНИЯ ИНФОРМАЦИИ, КАСАЮЩЕЙСЯ АНАЛОГИЧНОГО ПРОДУКТА ПРОДУКТА

  Номер публикации: 20220309560

  Реферат: Система и способ предоставления информации, относящейся к аналогичному продукту продукта. Способ включает получение по меньшей мере одного числового запроса, содержащего числовую часть (части) и нечисловую часть (части). После этого способ включает идентификацию наличия продукта/ов, соответствующего по меньшей мере одному числовому запросу. Кроме того, способ включает в себя формирование положительного указания и/или отрицательного указания на основе идентификации доступности продукта/продуктов. После этого способ включает в себя идентификацию по меньшей мере одного числового варианта для числовой части(ей) на основе отрицательного указания, намерения по меньшей мере одной нечисловой части указанного каждого числового запроса и доступности аналогичного продукта(ов) продукта/продуктов. с. Кроме того, способ включает предоставление информации, относящейся к аналогичному(им) продукту(ам), на основании по меньшей мере одного числового варианта числовой части(ей) и доступности аналогичного(их) продукта(ов).

  Тип: Заявка

  Подано: 16 марта 2022 г.

  Дата публикации: 29 сентября 2022 г.

  Заявитель: FLIPKART INTERNET PRIVATE LIMITED

  Изобретатели: Пранит Ашок Мехта, Кришна Азад Трипати, Джаеш Багерия

• Система и способ включения и выполнения услуг и функций для разных типов устройств и поставщиков услуг в устройстве связи

  Номер патента: 11455664

  Abstract: Способ включения услуг и функциональных возможностей для различных типов устройств и поставщиков услуг в устройстве связи включает в себя обработку первого типа функции устройства, первого типа услуги и первой функции стоимости из устройство, получение первого встроенного программного обеспечения и передача первого встроенного программного обеспечения на устройство связи для выполнения, активация первого набора инструкций, разрешающих обслуживание, для включения первого обслуживания и первой функциональности, связанной с первым встроенным программным обеспечением, когда первое встроенное программное обеспечение выполняется на устройстве связи , обработку второго типа функции устройства, второго типа службы и второй функции стоимости из устройства, получение второго встроенного программного обеспечения для выполнения на устройстве, передачу второго встроенного программного обеспечения на устройство и активацию второго набора инструкций, разрешающих обслуживание для включения второй службы и второй функциональности, связанной со второй фирмой повторно, когда на устройстве выполняется вторая прошивка.

  Тип: Грант

  Подано: 20 декабря 2013 г.

  Дата выдачи патента: 27 сентября 2022 г.

  Правопреемник: SAANKHYA LABS PRIVATE LIMITED

  Изобретатели: Параг Найк, Вивек Кимбахун

• Способ приготовления сухого электрода

  Номер патента: 11456451

  Реферат: Раскрыт способ изготовления сухого электрода. Метод включает смешивание наночастиц и графеновых нанолистов в виде порошка для получения нанокомпозита. Нанокомпозит сжимают, чтобы получить уплотненный материал, который скручивают, чтобы получить активную пленку трехмерной графеновой архитектуры (3D-GAF). Активная пленка 3D-GAF ламинируется на токосъемнике для получения сухого электрода каркаса трехмерной графеновой архитектуры для устройств накопления энергии следующего поколения.

  Тип: Грант

  Подано: 15 октября 2020 г.

  Дата выдачи патента: 27 сентября 2022 г.

  Правопреемник: NANOSPAN INDIA PRIVATE LIMITED

  Изобретатели: Венкатарамана Гедела, Рави Кант Нугуру

• Солнечная насосная система и способ эксплуатации солнечной насосной системы

  Номер патента: 11456697

  Реферат: Солнечная насосная система и способ эксплуатации солнечной насосной системы, система содержит множество солнечных модулей, по крайней мере один частотно-регулируемый привод, содержащий по крайней мере один преобразователь, по крайней мере одно подключенное коммутационное устройство к солнечному модулю и частотно-регулируемому приводу и по крайней мере один двигатель переменного тока, подключенный к выходному источнику питания частотно-регулируемого привода. Коммутационное устройство управляет подачей мощности постоянного тока, передаваемой на ЧРП, на основе входных данных, полученных от контроллера ЧРП, путем изменения выходного напряжения в соответствии с требованиями нагрузки двигателя переменного тока. Способ, включающий этапы управления подачей выходного напряжения солнечных модулей через переключающее устройство, чтобы обеспечить достаточную мощность для солнечного насоса в соответствии с требованиями двигателя, чтобы избежать отключения путем увеличения или уменьшения выходного напряжения солнечного модуля. модулей на заданную долю напряжения в течение заданной доли времени.

  Тип: Грант

  Подано: 16 ноября 2018 г.

  Дата выдачи патента: 27 сентября 2022 г.

  Правопреемник: DELTA ELECTRONICS INDIA PRIVATE LIMITED

  Изобретатели: Бхупиндер Кумар Бхаяна, Сумит Аггарвал

• КОМПОНЕНТ ОДЕЖДЫ И ОДЕЖДА, СОСТОЯЩАЯ ИЗ НЕГО

  Номер публикации: 20220295926

  Резюме: Настоящее изобретение в целом относится к компоненту одежды для использования в одежде. Компонент одежды содержит: непроницаемый для жидкости базовый слой; непроницаемый для жидкости периферийный слой, расположенный вдоль периферии непроницаемого для жидкости базового слоя; и пространство, определяемое непроницаемым для жидкости основанием и периферийными слоями. Когда одежда, содержащая компонент одежды, надевается на пользователя, одежда образует уплотняющее соединение между непроницаемым для жидкости периферийным слоем и кожей пользователя, так что непроницаемая для жидкости основа и периферийные слои предотвращают попадание жидкости в пространство и из него, а космос собирает телесные жидкости от пользователя.

  Тип: Заявка

  Подано: 16 марта 2022 г.

  Дата публикации: 22 сентября 2022 г.

  Заявитель: MAS INNOVATION (PRIVATE) LIMITED

  Изобретатели: Руванди Фернандо, Ачала Сатхарасингхе, Данушка Гунасекара, Шайма Низар, Супун Премасири, Тилина Калахе

• УСТРОЙСТВО ПОВЫШЕНИЯ ПОДЪЕМНОЙ ГРУЗОПОДЪЕМНОСТИ ЛЕТАТЕЛЬНОГО АППАРАТА С НЕПОДВИЖНЫМИ КРЫЛАМИ

  Номер публикации: 20220297829

  Резюме: Настоящее изобретение относится к подъемному узлу (300) летательного аппарата. Подъемный узел (300) содержит крыло (102) и по меньшей мере вертикальный ротор (118), расположенный под крылом (102). Вертикальная ось (121) вертикального несущего винта (118) расположена в пределах размаха крыла (102). Вертикальный ротор (118) работает во время полета летательного аппарата вперед. Установочное расстояние (122) между передней кромкой (108) и вертикальной осью (121) вертикального несущего винта (118) зависит от частоты вращения несущего винта (118), угла атаки (116) крыла и хорда крыла (117). Узел подъемной силы (300) создает увеличенную подъемную силу, превышающую сумму подъемной силы, создаваемой крылом (102) и ротором (118) по отдельности, что позволяет использовать малые крылья и, следовательно, подвергаться меньшему сопротивлению.

  Тип: Заявка

  Подано: 25 июля 2020 г.

  Дата публикации: 22 сентября 2022 г.

  Заявитель: UBIFLY TECHNOLOGIES PRIVATE LIMITED

  Изобретатели: Чакраварти С.Р., Омкар Нарендра ВАЛВЕКАР, Гоудхэм Р., Шри Рагхав Р., Рампракаш РАВИЧАНДРАН

• СИНЕРГИСТИЧЕСКАЯ ФУНГИЦИДНАЯ КОМПОЗИЦИЯ

  Номер публикации: 20220295790

  Резюме: Настоящее изобретение относится к синергической фунгицидной композиции, содержащей соединение на основе стробилурина, валидамицин и соединение А, выбранное из группы, включающей тифлузамид, гексаконазол, пропиконазол, трициклазол и дифеноконазол. Композиция по настоящему изобретению снижает нормы применения каждого из активных ингредиентов и не является фитотоксичной.

  Тип: Заявка

  Подано: 15 июня 2020 г.

  Дата публикации: 22 сентября 2022 г.

  Соискатели: НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ JDM PRIVATE LIMITED, SUMISHO AGRO INDIA PVT. ООО

  изобретателей: Парикшит МУНДХРА, Джитендра МОХАН

• СИСТЕМА И СПОСОБ НАСТРОЙКИ ЦИФРОВОЙ ПЛАТФОРМЫ ПОД ЦЕЛЕВОГО ПОЛЬЗОВАТЕЛЯ

  Номер публикации: 20220300991

  Abstract: Система и способ настройки цифровой платформы для целевого пользователя. Способ включает прием в блоке приемопередатчика [102] целевого числа выбора пользователя по меньшей мере для одного действия высокой ценности (HVA) на цифровой платформе. После этого способ включает определение блоком обработки [104] квантильной оценки для целевого пользователя на основе первого набора пользователей, идентифицированных из множества пользователей на цифровой платформе. Кроме того, способ с помощью блока обработки [104] определяет показатель важности для HVA/s на основе, по меньшей мере, успешного размещения первого заказа второй группой пользователей, идентифицированных из множества пользователей. После этого способ включает в себя определение блоком обработки [104] оценки для HVA/s на основе квантильной оценки и оценки важности для настройки цифровой платформы.

  Тип: Заявка

  Подано: 16 марта 2022 г.

  Дата публикации: 22 сентября 2022 г.

  Заявитель: FLIPKART INTERNET PRIVATE LIMITED

  Изобретатели: Пиюш Ранджан, Ашиш Гупта, Анмол Шривастава

• Создание интерактивного видео на основе дополненной реальности (AR) из существующего видео

  Номер патента: 11451721

  Аннотация: В этом раскрытии описан способ, включающий в себя определение одного или более кластеров объектов из множества кадров видеоконтента. По меньшей мере, один из одного или более кластеров объектов представляет собой кластер объектов с перемещением по множеству кадров. Способ включает в себя извлечение определенного одного или более кластеров объектов из множества кадров для создания набора кадров, в которых извлечен один или более кластеров объектов, и вывод набора кадров, в которых извлечен один или более кластеров объектов. Это раскрытие описывает способ, включающий в себя получение набора кадров, содержащих один или несколько извлеченных кластеров объектов, визуализацию одного или нескольких наборов кадров в прямом эфире с камеры устройства и генерацию видеоконтента на основе визуализированного одного или нескольких наборов. кадров и пользователь, взаимодействующий с извлеченным одним или несколькими кластерами объектов.

  Тип: Грант

  Подано: 1 сентября 2020 г.

  Дата выдачи патента: 20 сентября 2022 г.

  Правопреемник: Soul Vision Creations Private Limited

  Изобретатели: Шравант Алуру, Гаурав Байд, Сарбарта Сенгупта

• Компонент для крепления кабеля к элементу корпуса

  Номер публикации: 20220294155

  Реферат: Компонент для крепления кабеля к элементу корпуса включает в себя секцию крепления, имеющую элемент крепления и секцию зажима кабеля, интегрально соединенную с секцией крепления. Секция зажима кабеля имеет трубчатую форму и образует кабельный туннель. Секция зажима кабеля имеет зажимной язычок, который отклоняется в кабельный туннель.

  Тип: Заявка

  Подано: 11 марта 2022 г.

  Дата публикации: 15 сентября 2022 г.

  Соискатели: TE Connectivity India Private Limited, TE Connectivity Germany GmbH

  Изобретатели: Хартмут Риппер, Йехья Ашур, Винот Кумар S

• Регулятор напряжения с низким уровнем шума

  Номер публикации: 202202

  Резюме: В соответствии с аспектом малошумящий электронный регулятор напряжения содержит регулирующий транзистор, служащий для регулирования входного напряжения постоянного тока для обеспечения регулируемого выходного напряжения постоянного тока, усилитель ошибки, выполненный с возможностью генерирования сигнала ошибки на основе опорного напряжения и напряжения обратной связи, при этом усилитель ошибки, получающий напряжение обратной связи через контур обратной связи, образованный между регулируемым выходным напряжением постоянного тока и напряжением обратной связи, и первый усилитель в контуре обратной связи, обеспечивающий коэффициент усиления, превышающий единицу, от регулируемого выходного напряжения постоянного тока и напряжения обратной связи.

  Тип: Заявка

  Подано: 31 июля 2021 г.

  Дата публикации: 15 сентября 2022 г.

  Заявитель: Steradian Semiconductors Private Limited

  Изобретатели: Алок Пракаш Джоши, Гиреш Раджендран

• МЕТОДЫ, СИСТЕМЫ И ПРОГРАММНЫЕ ПРОДУКТЫ ДЛЯ БЕЗОПАСНОГО ШИФРОВАНИЯ ДАННЫХ ДЛЯ ПЕРЕДАЧИ ЧЕРЕЗ НЕДОВЕРЕННЫХ ПОСРЕДНИКОВ

  Номер публикации: 20220294610

  Резюме: Изобретение направлено на системы, способы и компьютерные программные продукты, которые обеспечивают сквозную аутентификацию пользователя наряду с шифрованием для снижения рисков, создаваемых ненадежными или незащищенными промежуточными объектами. Изобретение (i) обеспечивает полное сквозное шифрование конфиденциальных данных, которые были введены пользователем на терминальном устройстве на одном конце и предполагаемым или авторизованным получателем на другом конце, (ii) гарантирует, что данные, введенные пользователем на терминальном устройстве не может быть прочитан каким-либо посредническим объектом, включая партнерское приложение или другое программное приложение, реализованное на терминальном устройстве, и (iii) устраняет риск успешных локальных атак на терминальное устройство для несанкционированного доступа к пользовательским данным или для несанкционированного получения доступ к ключам шифрования/дешифрования, которые могут быть использованы для несанкционированного доступа к зашифрованным данным пользователя.

  Тип: Заявка

  Подано: 10 марта 2022 г.

  Дата публикации: 15 сентября 2022 г.

  Заявитель: EPIFI TECHNOLOGIES PRIVATE LIMITED

  Изобретатель: Прутви САББУ

• Оптимизация производительности автономных транспортных средств

  Номер патента: 11442449

  Резюме: Оптимизация работы автономного транспортного средства (АВ) включает в себя получение информации, относящейся к множеству факторов, связанных с АВ. Множество факторов включает в себя маршрут, который должен пройти AV для поездки, тип дороги, включенной в маршрут, местоположение AV в реальном времени, время поездки и погодные условия во время поездки. . На основе полученной информации о рабочих компонентах АВ выбирается оптимальная конфигурация. Компоненты настраиваются в режиме реального времени для работы в оптимальной конфигурации. Когда компоненты работают в оптимальной конфигурации, мощность, потребляемая компонентами, снижается, а срок службы компонентов увеличивается по сравнению с тем, когда компоненты работают в первой конфигурации, отличной от оптимальной конфигурации.

  Тип: Грант

  Подано: 9 августа 2019 г.

  Дата патента: 13 сентября 2022 г.

  Правопреемник: ANI TECHNOLOGIES PRIVATE LIMITED

  Изобретатели: Сатья Нараянан Нагараджан, Гаурав Агарвал

• Методы и системы для выявления, обработки и отладки зависшего потока

  Номер патента: 11442843

  Реферат: Представлены различные способы отладки зависшего потока программного приложения. Может быть выполнен модуль монитора потоков, который отслеживает любые зависшие потоки во множестве исполняемых потоков. Может быть получено сообщение инициализации мониторинга, которое инициирует мониторинг потока потока. В ответ на сообщение инициализации мониторинга отслеживание потока может быть начато путем определения того, было ли получено сообщение обновления для потока в течение периода времени, отведенного для отправки сообщения обновления. Если сообщение об обновлении не получено, поток может быть идентифицирован как зависший. Отладочная информация, сгенерированная в ответ на идентификацию зависшего потока, может использоваться для создания улучшенной версии программного приложения, которое предотвращает зависание.

  Тип: Грант

  Подано: 7 ноября 2019 г.

  Дата патента: 13 сентября 2022 г.

  Правопреемник: DISH Network Technologies India Private Limited

  Изобретатели: Гаджанан Хегде, Ракеш Элуван

• Управление и предоставление пользовательского контента, связанного с медиаконтентом по запросу.

  Номер патента: 11445257

  Резюме: Здесь представлены система хранения и доставки медиаконтента и соответствующие методы работы. Раскрытый способ доставки предоставляемого пользователем контента, который связан с медиаконтентом по запросу, включает в себя: инициирование воспроизведения медиаконтента по запросу на первом презентационном устройстве; прием загруженного медиаконтента, при этом загрузка загруженного медиаконтента инициируется во время воспроизведения медиаконтента по требованию на первом презентационном устройстве; и связывание загруженного медиаконтента с медиаконтентом по запросу. После выполнения связывания способ вызывает воспроизведение медиаконтента по запросу на втором презентационном устройстве и вызывает воспроизведение загруженного медиаконтента после воспроизведения медиаконтента по запросу на втором презентационном устройстве или после приостановки воспроизведения медиаконтент по запросу на втором устройстве представления.

  Тип: Грант

  Подано: 20 октября 2021 г.

  Дата патента: 13 сентября 2022 г.

  Правопреемник: DISH Network Technologies India Private Limited

  Изобретатель: Рашми Ранджан

• Сенсорный модуль для установки в двигатель

  Номер патента: 11444514

  Реферат: Модуль датчика для установки в двигателе включает держатель, приспособленный для установки во влажной камере двигателя, датчик температуры, приспособленный для установки в сухой камере двигателя , датчик углового положения, установленный на держателе, соединительный интерфейс, предназначенный для вставки в соответствующий разъем, и уплотнительный элемент, расположенный между датчиком углового положения и датчиком температуры. Датчик температуры отстоит от держателя. Датчик поворотного положения и датчик температуры подключены через множество сигнальных линий к интерфейсу соединителя. Уплотнительный элемент герметично пронизан сигнальными линиями от одного из датчиков поворотного положения и датчика температуры.

  Тип: Грант

  Подано: 15 сентября 2020 г.

  Дата выдачи патента: 13 сентября 2022 г.

  Правопреемник: TE CONNECTIVITY INDIA PRIVATE LIMITED ET AL.

  Изобретатели: Себастьян Вихерт, Манивасакан Равинтиран, Брэм Эмбо, Пувентан А., Шивапрасад Б., Игнас Ванкейрисбилк, Киранпал Сингх, Манджунатха Д. В.

• Система и способ идентификации информации об объекте в изображениях или видеоданных

  Номер патента: 11443277

  Реферат: Предложены системы и способы идентификации товара на изображении и вывода единиц хранения товара. Система состоит из трех основных компонентов: сервера базы данных, системы анализа данных и стандартной информационной панели. Сервер базы данных содержит изображения запасов в реальном времени, а также исторические изображения каждого типа продукта. Система анализа данных выполняется компьютерным процессором, сконфигурированным для применения алгоритмов обнаружения и классификации объектов, а также алгоритмов глубокого обучения для обнаружения информации о продукте, зафиксированной на изображении. Система анализа данных также настроена на определение категорий иерархической классификации продукта. Стандартная информационная панель настроена на вывод отчета с информацией о продукте.

  Тип: Грант

  Подано: 8 мая 2020 г.

  Дата патента: 13 сентября 2022 г.

  Правопреемник: Fractal Analytics Private Limited

  Изобретатели: Пракаш Ванапалли, Викаш Чалла, Сачин Чандра Бонагири, Сурадж Амонкар, Саранг Панде, Самрин Хан

Nanospan India Pvt Ltd

Поиск

Об использовании графена с бетоном говорят и исследуют с тех пор, как графен был изобретен в 2010 году, что принесло его изобретателям Нобелевскую премию. Nanospan – первая компания в мире, преодолевшая технологические и коммерческие барьеры и привносящая возможности графена и нанотехнологий в строительную отрасль, что в конечном итоге создает огромную добавленную стоимость для различных современных ПРОЕКТОВ СБОРНОГО БЛОКА.

Nanospan India Pvt Ltd внедряет инновации в области декарбонизирующих материалов, направленных на устойчивое развитие строительной отрасли. Наша цель — предложить промышленности, окружающей среде и обществу выбор передовых материалов, способных противостоять изменению климата и углеродному следу. В дополнение к уникальному наноинженерному подходу к инновациям в нашей продукции, мы также используем устойчивые методы для производства нашей продукции. Наша цепочка поставок в Индии сочетает в себе инновации, сырье и экономику.

SPANOCRETE™ Ассортимент:
Наша нанодобавка для бетона SPANOCRETE™ обеспечивает длительный срок службы, а также высокую начальную и конечную прочность на сжатие бетонных конструкций. Это делает конструкцию достаточно устойчивой, чтобы выдерживать повреждения от проникновения воды и экстремальных температур, а также обеспечивает хорошую экономию средств.

В текущем сценарии, чтобы бетонная смесь соответствовала всем ключевым функциональным требованиям различных клиентов, отдельные материалы добавляются отдельно на разных этапах строительства. Общая стоимость и время выполнения проекта резко возрастают по мере увеличения количества сырья. Вот где Nanospan имеет преимущество и представляет собой универсальную комплексную многофункциональную добавку в бетон SPANOCRETE™ , которая может заменить многие существующие добавки и химические реагенты «а ля карт».

Нанобетон на основе SPANOCRETE™ уже применялся при строительстве нескольких высотных зданий на юге Индии с исключительно хорошими результатами. Он был тщательно протестирован ведущими сторонними авторизованными испытательными лабораториями, клиентами и нашими собственными научно-исследовательскими лабораториями в Хайдарабаде. Кроме того, SPANOCRETE™ неоднократно подвергался испытаниям с различными составами бетонных смесей в различных климатических условиях. Он зарекомендовал себя в нескольких престижных туннельных проектах, заслуживших очень высокую оценку. Теперь, когда производственное предприятие находится на месте, оно готово к развертыванию в крупных инфраструктурных проектах по всей Индии.

Сборные формулировки проблем обычно формируются на основе приведенных ниже пунктов.

• Коррозия, вызванная хлоридами, для конструкций из сборного железобетона (ПК).
• Требование к конструкционным элементам с высокой начальной прочностью.
• Требуется гладкая поверхность (марка Fair Face).
• Возможность повысить прочность более тонких и изогнутых элементов без необходимости добавления волокон, что открывает путь к гибкости дизайна и формы.
• Общая стоимость проекта сборного железобетона и время его завершения.

«Как SPANOCRETE™ может обеспечить решение вышеуказанных проблем в улучшении общего показателя качества и устойчивости проекта сборного железобетона наряду с экономией средств?»

Вышеупомянутая экономия была получена на основе наших всесторонних испытаний для престижного проекта подземной инфраструктуры. Для сборного проекта она может быть еще выше.

Продукция и интеллектуальная собственность Nanospan конкурируют в глобальном масштабе. Они помещают Индию на глобальную карту инноваций в области наноматериалов, которые в конечном итоге могут способствовать продвижению продуктов «Сделано в Индии» для остального мира.

Бетонное строительство апрель — май 2022 г.

Имя *

ЗаголовокMr.Mrs.Ms.

Пожалуйста, сообщите нам ваше имя.

Компания *

неправильный ввод

Обозначение

Пожалуйста, сообщите нам ваше обозначение.

Мобильный *

Пожалуйста, сообщите нам ваш контактный номер.

Электронная почта *

Пожалуйста, сообщите нам свой адрес электронной почты.

Примечания *

Пожалуйста, кратко ваш запрос.

Другие наши дополнительные услуги:

Чтобы получать по электронной почте обновления о продуктах, новых технологиях и оборудовании, выберите интересующие вас категории продуктов и нажмите «Отправить». Это поможет вам сэкономить время, а также вы получите лучшие ценовые предложения от многих производителей, которые вы затем сможете оценить и обсудить.

Оборудование и машины *

Earthmoving

Road Construction

Производство бетона и размещение

Дребиние, скрининг, промывание

Управление материала/краны/транспорт

Сборная/кирпичная/блок/плитерный /опалубка

Другое оборудование/запасные части

Другое

Неверный ввод

Строительные изделия *

Добавки для бетона

Химикаты для гидроизоляции/ремонта

Архитектурные продукты

Товары для интерьера/экстерьера

Домашний декор

Другое

Неверный ввод

Капча *

Неверный ввод

Разработка коррозионностойкой железобетонной конструкции

Самир Сурлакер, директор компании Assess Build Chem Private Limited, подчеркивает важность прозрачного покрытия для бетонной конструкции, поскольку бетон как пористый материал нуждается в защите своей арматуры. Наряду с толщиной (количеством) покрытия, пористость

Подробнее …

В поисках более прочного бетона От HSC до UHPC

Технология бетона прошла долгий путь с тех пор, как римляне открыли материал, с ряд ингредиентов, включающих в себя множество минеральных и химических добавок, кроме, конечно, портландцемента, заполнителей (крупных и мелких) и воды. Эти ингредиенты

Подробнее…

Методы моделирования для защиты железобетонных конструкций

Анил Кумар Пиллаи, генеральный директор Ramco Cements, обсуждает два основных программного обеспечения (Life 365 и DuraCrete), используемых в промышленности для защиты железобетонных конструкций. Общий подход к проектированию ошибочен, поскольку мы учитываем только аспект нагрузки, в то время как экологический аспект в равной степени учитывается.

Волокна Туф, макросинтетические полипропиленовые волокна, представляют собой сверхпрочные синтетические волокна, специально разработанные для использования в качестве вторичного армирования, обеспечивающие превосходную устойчивость к растрескиванию бетона. Они заменяют стальные волокна в ассортименте

Подробнее …

Использование стержней с головками в железобетонных конструкциях

При проектировании и строительстве железобетонных конструкций исторически основное внимание уделялось использованию склеенной прямой или изогнутой арматуры в качестве метода. для крепления арматуры. Это зависит от целостности связи между арматурным стержнем и бетоном, чтобы обеспечить достаточную анкеровку

Подробнее…

Инновации Простой, эффективный и экономичный инструмент для создания активов

Инновации и предпринимательство являются важными составляющими успешного коммерческого предприятия. Способы, которыми эти две концепции подпитывают предпринимательство, являются тем, что предприниматели никогда не перестают исследовать. Нет никаких сомнений в том, что инновации были

Подробнее …

Реакционная способность алита и белита по отношению к устойчивости бетона

Алит и белит являются преобладающими фазами в рецептуре портландцемента. Алит представляет собой нечистый трехкальциевый силикат (C3S), а белит представляет собой нечистый двухкальциевый силикат (C2S). Примеси являются неотъемлемой частью производства цемента

Подробнее …

Инновационный, экономичный, прочный и устойчивый Бетон со сроком службы более 100 лет

Бетон является универсальным строительным материалом и используется изо дня в день. его потребление растет во всем мире. В мировом потреблении она уступает только воде. Без бетона невозможна никакая строительная конструкция

Подробнее…

Fosroc: Строительство, цементирование и поддержка

Fosroc является основой группы JMH. В компании работает более 1700 сотрудников в 17 операционных компаниях, расположенных в Европе, странах Персидского залива и Ближнего Востока, Индии, Южной Азии и Китае. Через торговую компанию FGT она обслуживает еще 50 стран. предпринимательство и инновации. Он диверсифицировался в три основных вида деятельности: производство, торговля и экспедирование грузов

Подробнее. ..

Геополимерный бетон на основе золы феррохрома

Джотирмой Мишра, к.т.н. Научный сотрудник кафедры гражданского строительства Технологического университета Вир Сурендра Сай, Бурла, Одиша, представляет свое исследование о целесообразности и прочности на сжатие геополимерного бетона

Подробнее …

Использование промышленных побочных продуктов в производстве бетона Добиться снижения выбросов CO2

Так как каждая тонна произведенного цемента (OPC) выбрасывает 0,96 тонн CO2, существует острая необходимость в продвижении смешанных материалов (например, GGBS & PSC) и просеянного шлака, чтобы добиться снижения выбросов CO2, уменьшения эффекта парниковых газов, сокращения эксплуатации

Подробнее …

Бамбуковое волокно as a Армирующий материал для бетона

В большинстве развивающихся стран спрос на сталь для использования в качестве армирующего материала растет день ото дня. Однако, когда стали не хватает, можно рассматривать бамбук как альтернативный материал для армирования

Подробнее. ..

Белый цемент в Индии

Белый цемент пользуется большим спросом в странах с жарким климатом, поскольку белые бетонные поверхности отражают больше тепла, чем стандартный серый бетон. Белый цемент становится продуктом с добавленной стоимостью. Преимущества микроволокон как в пластическом, так и в затвердевшем состоянии бетона и их вклад в повышение устойчивости.

Подробнее…

Устойчивость в цементе и бетоне

Интегрированная стратегия проектирования материалов и конструкций, обеспечивающая прочность за счет долговечности, является необходимостью, поскольку конструкции рассчитаны на пластичность и структурную целостность. Д-р С. Б. Хегде, президент отдела производства

Подробнее…

Цементная матрица, армированная тканью, для структурного усиления мостов и кабельного раствора для максимальной защиты сухожилий

Спрос на структурное усиление стареющих конструкций быстро растет в зданиях, промышленных сооружениях, инфраструктурных проектах, таких как мосты, дамбы и т. д. Структурное усиление также

Подробнее …

Практические примеры долговечности крупногабаритных GGBS Бетон, используемый в морских сооружениях

Долговечность и прочность являются двумя наиболее важными критериями и требованиями, предъявляемыми к бетонным конструкциям в течение длительного времени, устойчивым к атмосферным воздействиям, химическому воздействию и истиранию. Любой недостаток

Читать далее…

Прочная алюминиевая, безопасная для окружающей среды бетонная конструкция (DARE2C)

Цемент является основным вяжущим компонентом при производстве бетона в строительной отрасли. Это сложное гидравлическое вяжущее, состоящее из четырех основных клинкерных компонентов; алит (Ca3SiO5), белит (Ca2SiO4)

Подробнее…

NBM&CW

Посмотреть онлайн Скачать

Предыдущие выпуски Подписаться

Бетонные конструкции

Просмотр онлайн скачать

Предыдущие выпуска подписывайтесь сейчас

MGS Architecture

Просмотр онлайн скачать

Предыдущие выпуска подписки сейчас

L & ST

Просмотр онлайн

Предыдущие проблемы. Предыдущие выпуски Подпишитесь сейчас

НБМ Медиа Пвт. ООО | Все права защищены © 2022

Регистрация для бесплатной подписки

‘Неделя строительства в Индии’

Еженедельный электронный информационный бюллетень по строительной отрасли

Получайте последние новости, выпуск новых продуктов, объявленные/награжденные проекты, государственную политику, инвестиции и мнения экспертов.

Нажмите здесь, чтобы подписаться.

Нанонаука и нанотехнологии в Индии: что происходит

— Реклама —

В этой статье обсуждаются сферы нанонауки и нанотехнологии, а также учебные курсы, инициированные различными индийскими учреждениями.

Достижения в области науки и техники привели к появлению нанонауки в Индии. Это также привело к разработке различных специализированных курсов по нанонауке и нанотехнологии. Университеты и учреждения в Индии начали программы бакалавриата, магистратуры и исследований в области нанонауки, а затем и нанотехнологии как расширенной отрасли фундаментальных наук в Индии. Большинство курсов по нанонауке в Индии возникли на факультетах физики, химии, наук о жизни и других инженерных факультетах различных институтов.

— Реклама —

 

Введение в нанонауку и нанотехнологии начиналось как курс по выбору. Затем, с разрешения вышестоящих органов, в учреждениях открывались полноценные курсы (в основном двухгодичные). Несколько учреждений также начали исследовательские программы в междисциплинарных областях нанонауки и нанотехнологии. В некоторых университетах они появились как самостоятельные отделы или центры, а в других — как часть профильных факультетов.

10 лет назад объекты инфраструктуры не были хороши, но теперь во многих учреждениях они самодостаточны для запуска программ нанонауки и нанотехнологий. Преподаватели были приглашены из различных отделов фундаментальной науки и техники, чтобы внести свой вклад в области своей специализации. В нескольких учреждениях были наняты постоянные преподаватели для проведения программ в рамках таких схем, как специальные или инновационные центры или центры передового опыта (ЦП).

Такие агентства, как CSIR, DST, DBT, ICMT, DRDO, ISRO, DAE и другие национальные лаборатории, помогают аспирантам (PG) с их выпускными диссертациями или исследовательскими проектами через установленную ими инфраструктуру. Некоторые учреждения начали программы по нанонауке и нанотехнологиям в сотрудничестве с международными университетами. Студенты проводят один или два семестра за границей в рамках мандата этого сотрудничества.

Программы докторантуры также проводятся в рамках такого сотрудничества, в дополнение к независимым курсам обучения в университетах и ​​учреждениях.

Правительство Индии предприняло следующие инициативы для поддержки деятельности в области нанонауки и нанотехнологий:

1. Такие инициативы, как DST-Nanomission (нано-биотехнологическая деятельность) через DBT, ICMR и CoE in Nanoelectronics от MeitY, поддерживают нанонауку, нанотехнологию, нанобиотехнологию и деятельность в области наноэлектроники.
2. Восемнадцать комплексов сложных аналитических приборов (SAIF), созданных DST по всей Индии, играют важную роль в расширенной характеристике и синтезе наноматериалов для различных применений.
3. CoE в области нанонауки и нанотехнологий, созданный DST-Nanomission, помогает студентам-исследователям и PG в различных областях.
4. Тематические единицы передового опыта (TUE) для различных областей нанонауки и нанотехнологии играют важную роль в исследованиях, основанных на продуктах, для поддержки нанотехнологий.
5. Стипендии Visveswaraya PhD, предлагаемые MeitY, поддерживают различные нанотехнологические мероприятия в стране.
Программа
6. INSPIRE поддерживает научных сотрудников для работы в области междисциплинарных нанотехнологий, нанонауки и нанобиотехнологии.
7. DST-Nanomission поддерживает более 20 учебных программ PG для создания основы для нанонауки и нанотехнологий в Индии из примерно 70 программ PG, действующих в настоящее время в Индии.

Курсы и учебные программы по нанотехнологиям

Из почти 70 курсов по нанотехнологиям в Индии на Южную Индию приходится около 50 процентов учебных заведений. Таким образом, южная Индия вносит наибольший вклад в наращивание потенциала в области нанонауки и нанотехнологий.

Семнадцать программ финансируются правительством Индии, в том числе 10 из южной Индии.

Национальная инициатива по нанотехнологиям через Nanomission оказала влияние на следующие отрасли, которые объединились с академическими кругами и научно-исследовательскими лабораториями для разработки продуктов и процессов:

1. NFMTC – IITM и MCRC и Orchid Pharma
2. Центр нанотехнологий – UoH и лаборатория доктора Редди
3. Center Innovative Smart Textile — IITD, ARCI и Industries
4. Центр фармацевтических нанотехнологий – NIPER and Pharma Industries
5. Резиновые нанотехнологии — MGU и шины Apollo
6. Центр применения нанофосфоров, UoA – Nanotech Corp, США

За последнее десятилетие многие отрасли промышленности проявили интерес к области нанотехнологий, включая Tata, Mahindra & Mahindra, Piramal, Intel, Orchid Pharma, Apollo, Dr Reddy’s, Resil, Cranes, Panacea, Vecco, BEL, Moser Baer. , Insta Power, SBP Aqua Tech и Eureka Forbes.

Программа нанотехнологий в Индии была успешной благодаря следующим инициативам:

DST-Nanomission

DST спонсировала 11 подразделений нанонауки, семь центров и один вычислительный центр. Государственно-частные партнерства и три частных учреждения сыграли важную роль наряду с 30 центральными, автономными, государственными и признанными университетами. Результаты программы по нанонауке и нанотехнологиям показаны на рис. 1.

Рис. 1: 20 передач технологий

Impacting, Research, Innovation & Technology (IMPRINT)

В рамках инициативы IMPRINT-I правительства Индии (MHRD совместно с другими министерствами) особое внимание было уделено модернизации нанообразования и различных модулей. Было инициировано два проекта по нанообразованию и 21 проект по нанотехнологиям и связанному с ними оборудованию.

DRDO

Компания также занимается различными видами деятельности в области нанотехнологий через свои учреждения, такие как SSPL, DMSRDE, DLJ, NMRL, DMRL, NPOL, HEMRL и DIHAR. DRDO также запустила CoE в следующих областях:

1. Сенсоры на основе нанотехнологий для обнаружения ядерного, биологического, химического оружия (ЯБХ)
2. Нанооптоэлектронные устройства
3. ARCHEM-Университет Хайдарабада

DBT

  Это инициатива в области нано-биотехнологий, направленная на внедрение нанотехнологий для:

1. Ранняя трансляционная наука через инновации для будущих стратегий применения
2. Трансляционные исследования для проверки концепции, ведущей к разработке продукта
3. Инновационные инструменты и технологии для доклинических исследований в приоритетных областях

ICMR

ICMR сформировал целевую группу по наномедицинам и финансировал различные мероприятия в области нанотехнологий и наномедицины.

MeitY

Мейти профинансировал более 45 проектов в различных областях наноэлектроники, таких как светодиоды, органические светодиоды, органическая электроника, гибкая электроника, углеродные материалы, импульсные лазерные технологии, нанопроизводство, материалы на основе кремния, III- Материалы V и II-IV, CVD на основе плазмы, датчики, материалы с запрещенной зоной, моделирование, спинтроника, хранение данных, MEMS, NEMS, нанокристаллические материалы, устройства и передовые наноматериалы для зондирования, здравоохранения, обнаружения, сельского хозяйства и неврология. Наилучшей и наиболее продуктивной инициативой был CoE в области наноэлектроники (CEN) в IISc и IIT Bombay, а также Программа пользователей нанотехнологий в Индии (INUP фазы I и II). Результаты были чрезвычайно многообещающими: почти 72 патента и более 1000 статей.

Внедрение нанотехнологий в сельское хозяйство уже началось в Индии посредством различных научно-исследовательских проектов, в том числе:

1. Защита растений
2. Удобрения
3. Улучшение качества почвы
4. Очистка воды и контроль загрязнения
5. Датчики для мониторинга окружающей среды
6. Разведение
7. Производство наноматериалов из сельскохозяйственных ресурсов
Рис. 2: Количество институтов, предлагающих курсы по нанотехнологиям в различных штатах Индии (43% курсов предлагаются в учреждениях Южной Индии, из которых 23% находятся в штате Тамил Наду)

Помимо вышеизложенного, на рынок нанотехнологий также вышли авторитетные компании и различные стартапы в различных областях нанонауки и нанотехнологии. Вот некоторые из таких компаний:

1. Adnano Technologies: углеродные наноматериалы и передовые инструменты для определения характеристик
2. Advanced NanoTech Lab: Лакокрасочные материалы
3. Auto Fiber Craft (AFC) Порошки: специализированные серебряные наноматериалы
4. AVANSA Technology & Services: Углеродные наноматериалы и инструменты
5. Bee Chems: продукты из нанокремнезема
6. Bilcare: уникальная технология безопасности, называемая nonClonable, с использованием композитов для обеспечения надежной системы безопасности
7. Bottom Up Technology Corp.: Углеродные нанотрубки
8. Дабур Фарма: Доставка лекарств
9. Egoma Technologies: Нанопорошки
10. Eris Technologies: нанообразование и сертификация
11. Значок: Аналитические инструменты с упором на нанотехнологии и связанные с ними аналитические методы
12. Kerala Minerals & Metals (KMML): наночастицы диоксида титана
13. Micromaterials (P) Ltd: Нано- и микротехнологии и материалы-катализаторы; катализаторы нового поколения являются результатом радикально нового запатентованного процесса
14. Mittal Enterprises: наножидкость
15. Nano Передовая технология NanoCET: биостабилизированные наночастицы
16. Нанотехнологии: Нанопорошки, наноматериалы и суспензии
17. Элементы NanoResearch: Наноматериалы
18. Наношел: Нанотрубки и наноматериалы
19. NanoSniff Technologies: коммерческое отделение от CEN в IIT Bombay; создана для производства технологий, разработанных в рамках исследовательской работы, проводимой в CEN. Это первая индийская компания, успешно внедрившая микроконсольные и микронагревательные датчики
.
20. Nanospan: графен и инструменты
21. Технологии NanoXpert: Наночастицы
22. Navran Advanced Nanoproducts Development: Полимеризованные тонеры
23. Неоэкосистемы: металлические нанопорошки
24. Nilima Nanotechnologies: Нанопокрытия
25. NoPo Нанотехнологии: углеродные наноматериалы
26. Platonic Nanotech: высококачественный графен
27. Quantum Corporation: Наноматериалы и нанокомпозиты в качестве основных материалов для телекоммуникаций, электроники, доставки лекарств, проводящих пленок, освещения и энергетики без необходимости изменения существующих процессов
28. Reinste Nano Ventures: наноматериалы
29. Стекло Saint-Gobain: высококачественные нанопокрытия
30. Sisco Research Laboratories (SRL): химические вещества и наноматериалы
31. Smart Nanoz: наночастицы
32. Ultrananotech: наночастицы и графен
33. Vecco: Аналитические приборы

Дорожная карта будущего

Научное сообщество, лица, определяющие политику, высшие органы и финансирующие организации постоянно стремятся к прогрессу в различных областях нанонауки и нанотехнологий, таких как вода, чистая энергия, оборона, здравоохранение, медицина, инфраструктура, связь и более актуальных тем.